[发明专利]一种志贺氏菌的核酸恒温扩增检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种志贺氏菌的核酸恒温扩增检测试剂盒及检测方法，该试剂盒包含DNA提取试剂、恒温扩增反应液、阳性对照和阴性对照；本发明的检测试剂盒特异性高、灵敏度高；核酸扩增反应全部恒定同一温度，恒温扩增仅需35min，核酸试纸条检测结果需1～2min，全程从接受样品到获得结果整个检测过程仅需1h左右，且整个反应过程只需一个恒温仪器，特别适合志贺氏菌现场快速检测与排除。

主权项

一种志贺氏菌的核酸恒温扩增检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括下列组成：(1)DNA提取试剂；(2)恒温扩增反应液，包括：正向外围引物、反向外围引物、两条探针、两条扩增交叉引物、1×Thermol Buffer，MgSO₄，dNTPs溶液，Bst DNA聚合酶和无菌双蒸水；所述正向外围引物为：5′‑GGCAGGGAAATGTTCCGC‑3′；反向外围引物为：5′‑GCTTCTGACCATGGCTTCG‑3′；所述两条探针的序列分别为：正向5′端Biotin标记探针：5′‑Biotin‑CCACAAAATGGAGAGTTCTGACTTT‑3′；反向5′端FitC标记探针：5′‑Fitc‑TCCACTGCCGTGAAGGAA‑3′；所述两条扩增交叉引物分别为：扩增正向引物：5′‑GGTCTGGAAGGCCAGGTAGACTTCTGGAGGACATTGCCCG‑3′；扩增反向引物：5′‑TGCTCGCAGAGAAACTTCAGCTTTGCTGTCACTCCCGACA‑3′；(3)阳性对照：含有志贺氏菌ipaH基因的DNA质粒；(4)阴性对照：无菌双蒸水。