[发明专利]一种表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒传染性克隆的构建方法在审
| 申请号： | 201510802359.5 | 申请日： | 2015-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN105274089A | 公开（公告）日： | 2016-01-27 |
| 发明（设计）人： | 叶建强;周晓祥;秦爱建;邵红霞 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/63 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒传染性克隆的构建方法，是将特定PCR引物扩增出的绿色荧光EGFP基因片段，插入到线性化的REV病毒基因组Env基因的N端，利用商品化的重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆，随后转化到大肠杆菌进行质粒扩增与鉴定；并将阳性克隆转染DF1细胞，拯救获得表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 绿色 荧光 融合 蛋白 rev 病毒 传染性 克隆 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒传染性克隆的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1)利用下述引物，以REV传染性克隆质粒SNV质粒为模板，PCR扩增出SNV线性化载体；上游引物：5′CTAATTCTCCTTGTGGCTTGGTGGGGGTTT3′；下游引物：5′GATTTTGCTCGCCTGGTCAACTTTACCCTC3′。2)利用下述引物，以pcDNA3.1‑EGFP质粒为模板，PCR扩增出绿色荧光蛋白基因EGFP；上游引物：5′CAGGCGAGCAAAATCATGGTGAGCAAGGGCGAG3′；下游引物：5′CACAAGGAGAATTAGCTTGTACAGCTCGTCCAT3′。3)利用重组酶ExnaseTM II对步骤1)和2)得到的PCR产物进行快速重组克隆；阳性克隆转染DF1细胞拯救出表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒。
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