[发明专利]鱼鳔胶原蛋白多功能肽的制备方法

摘要

本发明涉及一种鱼鳔胶原蛋白多功能肽的制备方法，其包括清洗、酶解、纯化等步骤经活性筛选出抗氧化活性最强的组分作为目标肽氨基酸序列为：Gly‑Glu‑Pro‑Gly‑Pro‑Met‑Gly‑Leu‑Ala‑Gly‑Pro‑Leu‑Gly‑Pro‑Ala‑Gly‑Gly‑Ser‑Tyr‑Glu‑Ser‑Lys‑Pro‑Asn‑His。本发明具有操作方便、最终产品纯度高、具有抗氧化抗疲劳功效的优点。

主权项

一种鱼鳔胶原蛋白多功能肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）清洗步骤：选取鱼鳔用流动水彻底清洗，剪成小块儿（0.5×0.5 cm；用0.1 M NaOH 以1:10 (w/v)，每4 h更换一次溶剂，然后用冷蒸馏水洗至中性，可除去非胶原蛋白等杂蛋白；为了脱脂，接着用10%正丁醇以1:10 的重量体积比浸泡12 h，每3 h更换一次溶剂，然后用10倍体积的冷蒸馏水冲洗；在浸泡于85%左右的乙醇中12 h，每3 h更换一次溶剂，最后用冷蒸馏水冲洗；将预处理好的鱼鳔进行匀浆，备用；2）酶解步骤：以蛋白酶酶解匀浆后的鱼鳔，酶解时间均为6 h，加酶量均为鱼鳔匀浆质量的2%，料液比为1:3；3）纯化步骤：上述酶解步骤处理得到的组分浓缩、冷冻干燥后，通过Sephadex G‑25层析柱进一步分离纯化，样品浓度为25mg/mL，上样量为2mL，用去离子水洗脱，洗脱速度为1.5mL/min，于紫外分光光度计280nm下检测，收集各洗脱峰，浓缩后冷冻干燥，检测各洗脱组分的抗氧化活并收集活性较高的洗脱峰进行浓缩，冷冻干燥，以0.1%TFA去离子水配制1mg/mL样品溶液，过0.22μm微孔滤膜，利用RP‑HPLC进一步分离纯化；收集各洗脱峰后，浓缩并冷冻干燥，经活性筛选出抗氧化活性最强的组分作为目标肽氨基酸序列为：Gly‑Glu‑Pro‑Gly‑Pro‑Met‑Gly‑Leu‑Ala‑Gly‑Pro‑Leu‑Gly‑Pro‑Ala‑Gly‑Gly‑Ser‑Tyr‑Glu‑Ser‑Lys‑Pro‑Asn‑His。