[发明专利]一种仿生多孔组织工程软骨支架制备方法

摘要

本发明公开了一种仿生多孔组织工程软骨支架制备方法，将脱细胞处理的沃顿胶悬液与硫酸软骨素混合，沃顿胶悬液与硫酸软骨素混合比例为2.0：0.25～2.0：2.0，再次加入乙基二甲基胺丙基碳化二甲胺充分混匀后，室温下置于距光源5～10cm处在258nm波长紫外光照射下交联；将交联后的支架先后置于低温冰箱使支架定型，真空冷冻干燥获得成型支架，密封袋内贮存密封，60℃辐照消毒，4℃保存备用。本发明所制备的软骨支架具有仿生及多孔隙特点，可在体外诱导干细胞向软骨细胞分化，促进软骨基质成分蛋白多糖及Ⅱ型胶原表达，可用于体外构建组织工程化关节软骨，为修复关节软骨缺损提供高品质支架材料。

主权项

1.一种仿生多孔组织工程软骨支架制备方法，其特征在于，所述仿生多孔组织工程软骨支架制备方法：将脱细胞处理的沃顿胶悬液与硫酸软骨素混合，沃顿胶悬液与硫酸软骨素混合的质量比例为2.0：0.25～2.0：2.0，再次加入1％乙基二甲基胺丙基碳化二甲胺(EDAC)充分混匀后，室温下置于距光源5～10cm处在258nm波长紫外光照射下交联；将交联后的支架先后置于‑20℃冰箱、‑80℃低温冰箱使支架定型，真空冷冻干燥机中真空冷冻干燥，获得成型支架，密封袋内贮存密封，60℃辐照消毒，4℃保存备用；所述沃顿胶悬液与硫酸软骨素混合之前需要从人脐带中分离制备人脐带沃顿胶，并低温干燥后计量，向沃顿胶中加适量无菌三蒸水，于‑5℃反复粉碎成Wharton胶匀浆；再次加入无菌三蒸水低渗混匀，将低渗Wharton胶匀浆再放入液氮中冷冻15min，取出37℃水浴快速复温解冻，重复3次，使细胞膜破碎，之后向悬液中加入2.5g/L胰酶，37℃反复震荡消化30min，离心后获取脱细胞完全的沃顿胶悬液。