[发明专利]一种维生素B12分子印迹固相萃取磁性材料及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种维生素B12分子印迹固相萃取磁性材料及其制备方法和应用。该分子印迹固相萃取磁性材料是通过可逆加成-断裂链转移聚合技术（RAFT）和纳米反应器的技术，形成以苯甲基改性的纳米磁性高岭土（KLT）/Fe₃O₄为磁核体，以维生素B12分子印迹聚合物为外壳的固相萃取材料，通过填入固相萃取柱，对维生素B12进行分离提取。方法的回收率高（平均加标回收率为87.4%），相对标准偏差小（RSD%为0.8～6.3%），分离选择性高，灵敏度高（方法的检出限为0.082μg），具有有机溶剂使用更少、操作更为简单、快速、高效等特点。

主权项

一种维生素B12分子印迹固相萃取磁性材料的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1）磁性高岭土（KLT）/ Fe₃O₄高岭土微球体的合成：将15.4~28.6g的FeCl₃.6H₂O和0.7~1.3g的活性磁性高岭土分散于150~250mL的二次蒸馏水中；超声处理20~40min后，搅拌11~13h；开启搅拌，通氮气除氧，加入5.6~10.4g的FeCl₂﹒4H₂0；将溶液置于90±2℃的油浴中加热，向此溶液中逐滴地加入12~22mL质量分数为23～27%的氨水溶液；继续加热溶液0.8～1.2h后，冷却至室温；产物在水中通过磁铁提取和分离；最后产物在60±2℃的干燥箱中干燥即得磁性高岭土（KLT）/ Fe₃O₄高岭土微球体；2）苯甲基改性的磁性高岭土（KLT）/ Fe₃O₄微球体的制备：将280~520mg的磁性高岭土（KLT）/ Fe₃O₄高岭土微球体分散于5~10mL的甲苯中；加入308~572μL的4‑甲基氯苯基三氯硅烷，在充氮气的条件下，慢慢地加入三乙胺：甲苯体积比为（0.23～0.25）：（18～22）的溶液，得到的混合物在氮气保护下搅拌11~13h；最后的产物通过磁铁进行分离，并用甲醇提取；得到的苯甲基改进型的磁性高岭土（KLT）/ Fe₃O₄微球体在60±2℃的真空干燥箱内干燥而得；1～5mL的苯基溴化镁分散于5～10mL的超干四氢呋喃中，所得的溶液置于50±2℃的油浴中，并向溶液中逐滴加入280～520μL的干燥二硫化碳，油浴0.8～1.2h后，向溶液中加入100～180mg的上述苯甲基改进型的磁性高岭土（KLT）/ Fe₃O₄微球体，超声处理8～12min后，在充氮气保护下，继续在50±2℃的油浴中反应23～25h；所得的产物通过磁铁进行分离，并依次用四氢呋喃、甲醇和丙酮进行提取；最后产物在60±2℃的真空干燥箱中干燥，得苯甲基改性的磁性高岭土（KLT）/ Fe₃O₄微球体；3）MIP磁性微球体的制备：将9.3~17.3mg的维生素B12置于具塞锥形瓶中，加入5～15mL的二甲基亚砜，依次加入2.8~5.2mmol的甲基丙烯酸、14~26mmol的二甲基丙烯酸乙二醇酯和63~117mg的苯甲基改性的磁性高岭土（KLT）/ Fe₃O₄微球体，超声处理8～12min后，向溶液中加入22.4~41.6mg的偶氮二异丁腈；此混合物在充氮气保护下，于50±2℃的油浴中反应0.8～1.2h，在磁核的表面生成含维生素B12的分子印迹聚合物，得MIP磁性微球体；4）分子印迹聚合物中维生素B12的洗脱：用强磁铁分离步骤3）中的产物，用甲醇：乙酸体积比为8:2溶液洗脱，直至在洗脱液中检测不到维生素B12，即得维生素B12分子印迹固相萃取磁性材料，标记为磁性高岭土/ Fe₃O₄@MIP。