[发明专利]嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、CARMSLN-NKT细胞及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、CARMSLN‑NKT细胞及其制备方法和应用，所述嵌合抗原受体为MSLNScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ，包括串联的大鼠生长激素信号肽、MSLNScFv、CD8的铰链区和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域。采用本发明的CARMSLN‑NKT细胞与MSLN阳性的间皮瘤细胞共培养时，对间皮瘤细胞具有很好的特异杀伤活性。

主权项

1.一种工程化MSLN靶向性的NKT细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括：包装携带pWPXL‑MSLNScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ的慢病毒，得到病毒浓缩液；利用得到的病毒浓缩液感染NKT细胞，使NKT细胞表达嵌合抗原受体MSLNScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ；所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述感染NKT细胞的方法包括：取在75cm²培养瓶中培养的1×10⁷个NKT细胞，弃掉旧的培养液，加入2mL新鲜NKT细胞培养基GT‑T551、200μL病毒浓缩液、2μL 1×10^‑6mg/mL鱼精蛋白，终浓度为500U/mL的重组人白介素2，置于37℃、饱和湿度为5％的CO₂培养箱中感染12小时后，弃培养液；将感染后的细胞转至未经CD3和重组纤维连接蛋白包被的75cm²培养瓶中，加入20mL的NKT细胞培养基GT‑T551，再加入终浓度为500U/mL的重组人白介素2、终浓度为50ng/ml的CD3单克隆抗体和终浓度为50ng/mL的重组人白介素15，于37℃、饱和湿度为5％的CO₂培养箱中培养18h；将上述培养后的NKT细胞用重组人白介素2的终浓度为500U/mL的NKT细胞培养基GT‑T551进行体外诱导，待细胞的密度为85％时将细胞转入细胞培养袋中，隔2天加入重组人白介素2的终浓度为500U/mL、CD3单克隆抗体的终浓度为50ng/ml、重组人白介素15的终浓度为50ng/mL的新鲜NKT细胞培养基GT‑T551进行扩增培养。