[发明专利]一种同时检测5种金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E的胶体金试纸条及其制备方法有效
| 申请号： | 201510669537.1 | 申请日： | 2015-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN105353128B | 公开（公告）日： | 2017-01-25 |
| 发明（设计）人： | 匡华;王文彬;胥传来;徐丽广;马伟;刘丽强;吴晓玲;宋珊珊;胡拥明 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | G01N33/577 | 分类号： | G01N33/577;G01N21/78 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙)32104 | 代理人： | 时旭丹,张仕婷 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种同时检测5种金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E的胶体金试纸条及其制备方法，属于免疫分析技术领域。本发明公开了5种肠毒素夹心ELISA配对抗体的制备及筛选，同时检测5种肠毒素的试纸条及其制备方法。该试纸条由样品垫、喷有5条测试线和1条质控线的硝酸纤维素膜、吸水垫及PVC底板组合而成。5条测试线自前而后分别包被肠毒素E、D、C、B、A对应的捕获抗体，质控线包被羊抗鼠IgG二抗。目标物存在的情况下，金纳米粒子标记的5种肠毒素对应的金标检测抗体分别在相应的测试线与目标物形成夹心结构并显色。该试纸条可实现食品中5种肠毒素的同时检测，且测试方法简单、快速、灵敏、特异性好，对5种肠毒素A、B、C、D、E的肉眼最低检测限分别为5ng/mL、5 ng/mL、5 ng/mL、2.5 ng/mL及10 ng/mL。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 同时 检测 金黄色 葡萄球菌 毒素 胶体 试纸 及其 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种同时检测5种金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E的胶体金试纸条，其特征在于：在硝酸纤维素膜（10）上依次标记好5条测试线（3，4，5，6，7）和1条质控线（8），间隔6mm；将金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E对应的特异性捕获抗体JN2011‑01即CGMCC 8.90001，K3即CGMCC No.10863，1G7即CGMCC No.10867，5F2即CGMCC No.7212，1E5即CGMCC No.7214稀释到1mg/mL，分别用喷膜机BioJet Quanti3000将肠毒素A、B、C、D、E对应的捕获抗体对应喷至测试线（7、6、5、4、3）处；将0.5mg/mL羊抗鼠IgG二抗喷至质控线（8）处；37℃烘干2h，并切条备用；将吸附垫（9）粘附在硝酸纤维素膜（10）靠近质控线（8）的一端，将样品垫（1）粘附在硝酸纤维素膜（10）靠近测试线（3）的另一端；将硝酸纤维素膜（10）粘贴固定于PVC底板（11）上，4℃保藏至使用前；样品垫（1）与测试线（3）之间在硝酸纤维素膜（10）中间设有金标垫；金标垫上设有金标检测抗体（2）；测试线（7、6、5、4、3）分别包被有金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E对应的特异性捕获抗体；质控线（8）包被有羊抗鼠IgG二抗；吸附垫（9）与样品垫（1），硝酸纤维素膜（10）均粘附在PVC底板（11）上。
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