[发明专利]一种辣椒籽抗菌肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，该方法包括提取辣椒籽粗蛋白；应用食品级酶制剂对辣椒籽粗蛋白进行酶解；利用抗菌肽与细菌相互作用并联合凝胶层析对酶解液中的抗菌肽进行分离即得辣椒籽抗菌肽；由蛋白酶水解辣椒籽获得的抗菌肽，具有安全性高、抗菌性强的特点，在食品、饲料及化妆品等行业具有潜在利用价值。该方法利用抗菌肽与细菌结合的特性，实现了靶向性分离，克服常规抗菌肽分离的步骤繁琐、过程大量使用化学试剂的缺点，该发明以辣椒加工副产物为原料，增加了辣椒籽资源的可利用性。

主权项

一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：  （1）以辣椒籽为原料，将其粉粹过20目筛，在辣椒籽粉末中添加质量百分比浓度95%的食用乙醇，调节料液比为1:5～1:10，50～200W超声处理20～60min，然后于50～80℃浸提2～4h以脱辣椒碱；弃掉乙醇挥发净后，按料液比1:5～1:10的比例，在脱辣椒碱的辣椒籽粉中加入食品级正己烷，50～200W超声处理20～60min后，30～70℃下100～200rpm/min搅拌浸提4～10h，真空抽滤除去正己烷，挥干溶剂即得脱脂辣椒籽粉；  （2）按料液比1:20～1:30的比例在脱脂辣椒籽粉中添加蒸馏水，在温度20～40℃、pH7～9条件下，搅拌混合30～60min后，于4000～10000rpm离心10～30 min，收集上清液，上清液用0.1mol/LHCL和0.1mol/L NaOH调节pH值4～5以沉淀蛋白，再4000～10000rpm离心10～30 min收集沉淀，将收集的沉淀用纯水洗3遍后将pH调节为7，让沉淀的粗蛋白复溶，置于透析袋中，透析24h，冻干得到辣椒籽粗蛋白；   （3）制备质量百分比3～6%的辣椒籽粗蛋白水溶液，35～70℃下调节pH至2.0～9.0，添加酶酶解1～4h，将酶解液100℃煮沸5～10min灭酶，离心取上清液，上清液用截留分子量为 5KDa的超滤膜进行分离，收集滤液即得到分子量在5KDa以下的辣椒籽抗菌肽粗品溶液，冻干得辣椒籽抗菌肽粗品粉末；   （4）将辣椒籽抗菌肽粗品粉末配制成10～40mg/mL的水溶液，在37℃下与1.0×10⁵ CFU/mL细菌悬液混合，轻微振荡孵育反应10～60min后，经0.22微米微孔滤膜过滤除去菌体后，用葡聚糖凝胶G‑25凝胶层析柱检测细菌菌悬液孵育前后的辣椒籽抗菌肽粗品溶液的洗脱曲线图，与细菌菌悬液孵育后的辣椒籽抗菌肽粗品溶液在凝胶层析图谱上减少的峰，即为目标辣椒籽抗菌肽峰，收集即得辣椒籽抗菌肽。