[发明专利]一种同步提取-组合柱层析-结晶纯化制备虫草酸、虫草素的方法

摘要

本发明提供了一种同步提取-组合柱层析-结晶纯化制备虫草酸、虫草素的方法；以新鲜的虫草花（子实体）为起始原料，包括剪切、破碎、酶解、提取、层析分离、结晶、精制纯化。本发明以品相比较差的虫草花为原料，采用现代分离纯化技术，获得较高纯度的功能成分，制备出含量高达98.5的虫草酸、虫草素高纯物质，是一条较优的开发途径，可促进虫草类中药新药的研发，实现虫草的升级换代，工艺环保。

主权项

一种同步提取‑组合柱层析‑结晶纯化制备虫草酸、虫草素的方法，其特征在于，包括下列步骤：（1）原料选择：选择品相较差、利用率低的新鲜虫草花为原料，来源于GAP种植基地，具有绿色、稳定等特征；（2）清洗、除杂：用清水洗涤虫草花表面的灰尘、杂草等附作物，拣选肉眼可见的杂质；（3）剪切、破碎：沥干后的虫草花先通过切割机将原料长度分切至2cm以下的虫草花碎段，再将虫草花碎段放于胶体磨中，同时向胶体磨中添加虫草花碎段1‑1.5倍量的水协同破碎、细胞破壁，转速控制在2500～2800r/mi，得到虫草花浆料；（4）酶解：将步骤（3）获得的虫草花浆料置于酶解罐中，再添加浆料体积2‑3倍的纯净水，虫草花原料质量1‑2%的复合酶酶解，酶解温度38‑40℃，酶解时间150~180min，得到酶解过的虫草花混合液；（5）提取、浓缩：将上述酶解过的虫草花混合液用4‑5倍体积的0.5‑0.8%的醋酸水于50~60℃下动态提取至少两次，再通过200目的滤网过滤，获得提取液，提取液浓缩至1/2体积后准备上柱；（6）层析分离：将步骤（5）获得的浓缩液上柱，采用组合柱层析分离法，进行分离，选择填料XAD‑2型树脂与聚酰胺按质量比为（5‑6）：（5‑4）的比例搭配，上下组合装柱的形式；流动相选择水、20%乙醇水洗脱；分段收集水洗脱液、真空干燥含量大于70%的虫草酸流份、可获得高纯虫草酸粗品；分段收集20%乙醇洗脱液、真空干燥含量大于70%的虫草素流份、可获得高纯虫草素粗品；（7）结晶：将上述真空浓缩后虫草酸粗品、虫草素粗品分别在95%乙醇中重结晶2‑3次，得到纯度高达90%以上的虫草酸、虫草素；（8）精制纯化：对纯度90%以上的高纯虫草酸、虫草素，通过亚临界CO2进行逆萃取结晶，控制压力5~6MPa、温度45~55℃、时间40~50min，得到纯度高达98.5%的虫草酸、虫草素。