[发明专利]一种海藻酸钙-羧甲基纤维素钠共固定化白腐菌及其胞外酶的生物微胶囊和其制备方法

摘要

本发明涉及海藻酸钙‑羧甲基纤维素钠共固定化白腐菌及其胞外酶的生物微胶囊和其制备方法，所述生物微胶囊包含有壳体以及壳体内部芯材；壳体材料为海藻酸钙凝胶，海藻酸钙凝胶内部包埋白腐菌胞外酶交联聚集体；壳体内部芯材为氯化钙‑羧甲基纤维素钠水溶液，氯化钙‑羧甲基纤维素钠水溶液内部分散有白腐菌细胞和胞外交联酶聚集体。本发明生物微胶囊在制备过程中直接将白腐菌胞外酶制成交联酶聚集体，省去了将木质素降解酶系提纯的步骤，可有效降低生产成本，并与白腐菌形成密切的依附关系，提高了降解效率。

主权项

1.一种海藻酸钙‑羧甲基纤维素钠共固定化白腐菌及其胞外酶的生物微胶囊，其特征在于所述生物微胶囊包含有壳体以及壳体内部芯材；壳体材料为海藻酸钙凝胶，海藻酸钙凝胶内部包埋白腐菌胞外酶交联聚集体；壳体内部芯材为氯化钙‑羧甲基纤维素钠水溶液，氯化钙‑羧甲基纤维素钠水溶液内部分散有白腐菌细胞和白腐菌胞外酶交联聚集体；所述的生物微胶囊粒度大小为：3‑15mm；壳体厚度为：0.2‑2mm；采用以下方法制成:1）白腐菌胞外酶交联聚集体的制备：将白腐菌接种于液体培养基中，恒温培养6‑10天，过滤，收集菌丝，备用；过滤后的滤液经透析，浓缩，制得粗酶液；向粗酶液中加入饱和硫酸铵溶液和磷酸缓冲液，搅拌15‑20min，得反应液；向反应液中滴加浓度为25%的戊二醛，交联，离心，用醋酸缓冲液洗涤，得到白腐菌胞外酶交联聚集体；2）白腐菌悬液的制备，从下述a或b中选用任一方法制备白腐菌悬液：a将步骤1）所收集的菌丝，接种于固体培养基中培养5‑8天后，刮取培养基中的白腐菌孢子分散于氯化钙‑羧甲基纤维素钠水溶液中，制得白腐菌悬液；b将步骤1）中收集到的菌丝打散，直接分散于氯化钙‑羧甲基纤维素钠水溶液中，制得白腐菌悬液；3）共固定化微胶囊的制备：取步骤1）中制得的胞外酶交联聚集体分散于海藻酸钠水溶液中，得溶液A；然后再取步骤1）中制得的胞外酶交联聚集体分散于步骤2）中的白腐菌悬液中，得溶液B；搅拌下将溶液B滴加到溶液A中，搅拌成囊，再加无菌水稀释，过滤，得到微胶囊，然后将微胶囊置于氯化钙水溶液中固定，过滤，用无菌水洗涤3‑4次，得到海藻酸钙‑羧甲基纤维素钠共固定化白腐菌及其胞外酶的生物微胶囊。