[发明专利]一种基于间接竞争酶联免疫法定量检测80nmAuNPs的方法

摘要

本发明提供了一种基于间接竞争酶联免疫法定量检测80nmAuNPs的方法，采用酶联免疫分析技术中的间接竞争酶联免疫法，利用抗原抗体的特异性结合定量地检测了80nmAu粒子。与现有技术相比，本发明通过修饰剂的作用，将半抗原成功地合成为全抗原，为抗体得以产生作出了重大贡献。利用机体的免疫应答效应，成功的制备出特异性高的抗80nmAuNPs多克隆抗体，抗体的保质期较长，因此，可行性高；利用酶联免疫分析技术中的间接竞争酶联免疫法对80nmAuNPs进行了一种定量检测，该方法的发明为今后纳米材料的定量检测提供了一种可行性较高的方法。该方法操作简单，可行性高，灵敏度高，检出限低，可实现高通量检测。

主权项

一种基于间接竞争酶联免疫法定量检测80nmAuNPs的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a、80nmAuNPs的制备:取500µL HAuCl4溶液与99mL蒸馏水于三口烧瓶中，用集热式恒温加热磁力搅拌器加热至沸腾，过程需要15min～30min，向沸腾的溶液中快速加入柠檬酸三钠，反应液迅速变黑，然后变成了泥土色红，继续反应35min后，撤去加热装置，搅拌冷却至室温，收集4℃避光储存待用，此泥土红色溶液即为80nmAuNPs；步骤a加入0.7mL1wt%柠檬酸三钠溶液；步骤a中HAuCl4溶液的制备方法为：取1g HAuCl4•4H2O粉末溶解于50mL超纯水中，制得16.5mg/mL的HAuCl4溶液；b、80nmAuNPs包被抗原和免疫原的制备；c、80nmAuNPs抗体制备：将得到的80nmAuNPs免疫原注射到动物体内，得到80nmAuNPs抗体；d、利用纯化好的高特异性的80nmAuNPs抗体和80nmAuNPs包被抗原进行间接竞争酶联免疫分析法，通过建立标准曲线达到定量检测未知浓度的80nmAuNPs的目的；步骤b中80nmAuNPs包被抗原和免疫原的制备为：取步骤a制备的80nmAuNPs溶液，搅拌的状态下加入硫代乙醇酸TGA搅拌10‑25min后，继续加入羟基琥珀酰亚胺NHS和 1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDAC避光搅拌2‑5h，调节pH=9～10，加入1wt%牛血清白蛋白BSA或1wt%鸡卵清白蛋白OVA冰袋避光搅拌5h，即得相应得到了免疫原和包被抗原，将所得溶液置于透析袋中，蒸馏水透析8‑15h，收集4℃避光储存待用；步骤b中，硫代乙醇酸TGA与羟基琥珀酰亚胺NHS、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDAC的体积用量比为2:1:2。