[发明专利]DNA三向节活化的杂交链式反应用于尿嘧啶DNA糖基化酶的高灵敏检测

摘要

本发明涉及DNA三向节活化的杂交链式反应用于尿嘧啶DNA糖基化酶的高灵敏检测。本发明以DNA糖基化酶UDG为模型，开发了发夹重构的识别机制，将DNA修饰酶对底物的作用转化为杂交链式反应的触发过程，从而引起DNA的自组装过程，并实现了通用性DNA纳米器件的构建。该器件能够用于DNA修饰酶(尤其是UDG)的高灵敏检测和抑制剂筛选，具有潜在的应用价值。

主权项

1.一种基于DNA三向节活化杂交链式反应的尿嘧啶DNA糖基化酶检测方法，所述方法为非诊断目的的方法，其特征在于，(1)制备UDG识别探针、H1、H2，其中UDG识别探针是包括toehold、UDG酶识别序列、链迁移部分、位于UDG酶识别序列两端的两段互补的辅助序列且链迁移部分与识别序列杂交的发卡结构，识别探针与UDG酶结合可使得链迁移部分与识别序列的杂交变得极其不稳定，继而探针中两段互补的辅助序列发生配对杂交，原来的发夹结构发生重构，toehold和链迁移部分拉近，形成一个三向节触发链；识别探针的序列为CTT GCA ATT GTGA UTUTGT CTCAC TT ACAA AA ACG TTACC，H1的序列为ACAA CGAA CACG TTACC GGGTA GGGCG TTAGGA GGTA ACGT GTTC GTTG TAAT TGCA AGG，H2的序列为TGGGT TCCTAA CGCCC TACCC GGTAA CGTGT TCGTT GT GCAATT ACAA CGAA CACG TTACC GGTA GGCG GG；(2)加入UDG酶，进行杂交链式反应；(3)对反应结果进行信号检测。