[发明专利]六瓣红大蒜蒜酶灭活提取物HPLC指纹图谱的建立方法

摘要

本发明公开了一种宝坻“六瓣红”大蒜蒜酶灭活提取物HPLC指纹图谱的建立方法，具体步骤为将宝坻特有品种“六瓣红”鳞茎经固相萃取等步骤制备成供试品溶液，在一定条件下进行高效液相色谱分析检测，获得“六瓣红”大蒜蒜酶灭活提取物的HPLC指纹图谱。通过对10批次样品的HPLC指纹图谱分析，确定共有特征峰，得到标准指纹图谱。该标准指纹图谱能够为“六瓣红”大蒜的品种及产地鉴别和生产质量控制提供可靠的依据。本发明操作便捷，稳定性高，特异性强，重现性好，特征峰较多，分析效率高，利用本发明将能对“六瓣红”大蒜进行真伪及产地鉴别，并能全面、准确、有效的评价其内在品质质量。

主权项

一种六瓣红大蒜蒜酶灭活提取物HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）大蒜蒜酶灭活提取物待测溶液的制备：称取六瓣红大蒜鳞茎20g，加25‑30ml蒸馏水，90℃灭酶1h，破碎研磨，加甲醇定容至50ml，5000×g离心15min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤；（2）大蒜蒜酶灭活提取物供试品溶液的制备：C18固相萃取小柱经5ml甲醇、10ml超纯水活化，平衡15min；待测溶液以4ml/min速度过柱，再用5ml超纯水淋洗，低真空抽干；再由5ml甲醇洗脱后，室温下低流速氮气浓缩至0.5‑0.8ml，再以甲醇定容至1ml，经0.45μm微孔滤膜过滤待测；（3）高效液相色谱分析：色谱柱为：Eclipse Plus C18，5μm，4.6x250mm；保护柱为：Eclipse Plus C18 Grd，5μm，4.6x12.5mm；柱温35℃；流动相为甲醇和0.2%甲酸水溶液；采用梯度淋洗方式0→2 min→10 min→20 min，甲醇：60%→60%→80%→80%；二极管阵列检测器检测波长240nm；进样量50μL；在上述条件下分析供试品溶液，得到大蒜蒜酶灭活提取物HPLC指纹图谱；（4）重复上述（1）至（3），对10批次六瓣红大蒜蒜酶灭活提取物建立HPLC指纹图谱，通过比较分析确定了15个共有特征峰，其保留时间分别为：2.16 min、2.748 min、2.94 min、3.379 min、3.813 min、4.719 min、5.839 min、6.439 min、7.074 min、8.002 min、9.131 min、10.615 min、13.069 min、15.314 min、18.325 min，相对标准偏差（RSD）<1%，这些共有特征峰构成了六瓣红大蒜蒜酶灭活提取物HPLC标准指纹图谱。