[发明专利]一种基于固定化微生物技术修复土壤中雌二醇的方法

摘要

一种基于固定化微生物技术用于修复土壤中雌二醇的方法，涉及一种修复土壤的方法，包括以下过程：以叶腊石、棉仁饼与松针按重量份数比4:1:1混合为微生物固定化载体材料，灭菌后按照载体总重量的2‑5%接入菌悬液，然后每天按l.5毫升每克载体的量补加增殖培养基，制得固定化微生物颗粒，将制备好的固定化微生物颗粒按土壤重量确定合适的投粒比，用于雌二醇污染土壤进行修复；本发明利用固定化微生物技术降解土壤中的雌二醇，并探求在不同的土壤环境条件下，即不同环境温度、不同的pH值以及土壤含水率条件下，考查雌二醇的降解效果。

主权项

1.一种基于固定化微生物技术用于修复土壤中雌二醇的方法，其特征在于，所述方法包括以下过程：以叶腊石、棉仁饼与松针按重量份数比4:1:1混合为微生物固定化载体材料，灭菌后按照载体总重量的2‑5%接入菌悬液，然后每天按l.5毫升每克载体的量补加增殖培养基，制得固定化微生物颗粒，将制备好的固定化微生物颗粒按土壤重量确定合适的投粒比，用于雌二醇污染土壤进行修复；具体实施过程为：（1）固定化载体材料的预处理将新鲜的棉仁饼与松针在室温下风干后按重量比1:1混合，粉碎或辗碎过40目标准筛备用，将粒径为0.2‑1毫米的叶腊石颗粒与过筛后的棉仁饼与松针按重量比4:1:1混合均匀后装入灭菌锅，121°C条件下高温蒸汽灭菌2.5小时，装入塑料桶内置于无菌室中待温度降到室温，备用；（2）固定化微生物颗粒的制备将含有雌二醇降解菌的菌悬液，均匀地加入经预处理后的固定化载体表面并混合均匀，接种量按照载体重量2‑5%接入，密封后放入28°C恒温培养箱中避光培养，每天按l.5毫升每克载体的量补加增殖培养基，增殖培养基为酵母0.5g/L、酪蛋白酸水解物0.5 g/L、可溶性淀粉0.5 g/L、MgSO4·7H2O 0.05 g/L、胰蛋白胨0.3 g/L、葡萄糖0.5 g/L、丙酮酸钠0.3 g/L、KH2PO4 0.25 g/L，增殖培养3天后制得固定化微生物颗粒；（3）雌二醇污染土壤的制备用天平准确称取10毫克雌二醇标准品于10毫升容量瓶内，用甲醇定容制得浓度为1克每升的雌二醇标准储备液，‑20℃保存，备用；取一定量的雌二醇标准储备液利用超纯水稀释至10毫克每升制得标准工作液，4℃保存，备用；标准工作液现用现配；将采集的天然土壤经风干，121℃高温灭菌后，向其均匀喷洒浓度为10毫克每升的雌二醇标准工作液，使土壤中雌二醇含量为1毫克每千克；（4）固定化微生物颗粒对雌二醇的降解效果将制备好的固定化微生物颗粒按土壤重量5‑15%的投粒比，投入雌二醇污染土壤中并混匀，利用缓冲溶液调节土壤pH为6‑8，土壤含水率为15%至饱和，降解过程中每天对土壤补水一次以维持土壤含水率；整个降解过程中温度控制在10‑40℃；14‑15天后考查土壤中雌二醇的去除率。