[发明专利]一种叶酸-壳聚糖-表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）纳米粒的制备方法

摘要

本发明为一种叶酸-壳聚糖-表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）纳米粒的制备方法，属于食品生物技术领域。工艺关键在于，制备浓度为1-2mg/ml叶酸偶联壳聚糖溶液，将叶酸偶联壳聚糖溶于1%的冰醋酸溶液中，加入一定量的EGCG，用1%的NaOH溶液调节pH值3-5，制成EGCG浓度为0.5-1mg/ml的叶酸偶联壳聚糖溶液。取一定量TPP用纯水溶解，将TPP溶液和叶酸偶联壳聚糖的EGCG溶液分别过0.45μm的滤膜，向匀速搅拌的叶酸偶联壳聚糖EGCG溶液逐滴加入TPP溶液，叶酸偶联壳聚糖与TPP的比例为4-6：1，最后得到负载EGCG的叶酸壳聚糖纳米微球。

主权项

一种叶酸‑壳聚糖‑表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）纳米粒的制备方法 ，其特征在于采取如下方法：A、叶酸活性酯的制备：称取叶酸（FA）200‑300mg，溶于5‑10ml无水的二甲基亚砜（DMSO）中，加入二环己基碳二亚胺（DCC）200‑300mg和N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）100‑200mg溶解，过夜后滤去二环己基脲（DCU），滤液经减压蒸馏除去部分溶剂，搅拌中逐滴将滤液滴入冰冷的含30‑40%丙酮的无水乙醚溶液中，得黄色沉淀DCU，滤液经旋转蒸发、真空冷冻干燥，得到叶酸活性酯；B、壳聚糖的合成：称取壳聚糖（CS）100‑200mg，溶于30‑60ml醋酸‑醋酸钠缓冲液（PH4.6），得到壳聚糖醋酸水溶液，在磁力搅拌下以2‑3ml/min的速度缓慢向溶液中加入8‑15ml叶酸活性酯的DMSO溶液（20mg/ml），30‑40℃反应18‑20h，离心，用蒸馏水洗涤沉淀数遍，重新将沉淀溶于2‑4%的醋酸水溶液中，得到1‑2mg/ml叶酸偶联壳聚糖溶液；C、叶酸壳聚糖的分离纯化：取适量叶酸偶联壳聚糖溶液，低速离心后取上清液，用Sephadex G‑25葡聚糖凝胶层析柱进行分离，用2‑4%醋酸溶液洗脱，流速1.5ml/min；在363nm波长检测洗脱，收集流出的第一个吸光峰值，冷冻干燥得叶酸偶联壳聚糖纯品；D、叶酸偶联壳聚糖的EGCG溶液制备：将叶酸偶联壳聚糖溶于1‑3%的冰醋酸溶液中，称取一定量的EGCG加入溶液中，用NaOH溶液调节pH3‑5，制成EGCG含量为0.5‑1mg/ml的叶酸偶联壳聚糖溶液；E、纳米颗粒的制备：取一定量TPP用纯水溶解，保持叶酸偶联壳聚糖与TPP比例在4‑6：1之间，将TPP溶液和叶酸偶联壳聚糖EGCG溶液分别过0.45μm的滤膜，向匀速搅拌的叶酸偶联壳聚糖的EGCG溶液逐滴加入TPP溶液，得负载EGCG的叶酸壳聚糖纳米微球。