[发明专利]一种凹土对乳酸球菌的吸附方法

摘要

本发明公开了一种凹土对乳酸球菌的吸附方法，将经过前处理的凹土用1mol/L的H₃PO₄缓冲液预处理，于0.2mol/L、pH为6的NaH₂PO₄‑Na₂HPO₄缓冲液于35℃对乳酸球菌菌液进行吸附80min即可得到最佳吸附效果，与现有技术相比具有如下明显优点：a)吸附效果好：吸附率可达96％以上，突破了现有吸附率；b)方法简单，操作便捷，适用于工业化生产。

主权项

1.一种凹土对乳酸球菌的吸附方法，其特征在于包括以下步骤：（1）凹土的前处理：将未处理的凹土块研磨成粉，再用200目筛过滤，按凹土与去离子水1:30的质量比加入去离子水，用磁力搅拌器搅拌24h后，静置12h，取中间层凹土悬液，再加入其一倍量的去离子水，从搅拌步骤开始重复进行3次，得到纯化的凹土，放入冰箱在0‑10℃的温度下保存备用；(2）乳酸球菌的筛选：按照以下步骤，MRS筛选培养基的制备→培养基和仪器的灭菌→市售酸奶梯度稀释→倒平板→涂布→37℃恒温培养24h→观察菌落个数符合要求的平板，挑取典型菌落→革兰氏染色→镜检→分离纯化→挑取优势菌株进行菌种保藏→测生长曲线；（3）配制乳酸球菌菌液：根据上述生长曲线取10mL对数生长期中后期的菌液在5000r/min条件下离心10分钟，弃去上清液，向沉淀中加入0.85%的生理盐水，离心洗涤两遍，最后将菌体悬浮于生理盐水中，当需要用时配制成所需浓度的乳酸球菌菌液；所述乳酸球菌菌液的初始浓度为4.4‑7.2g/L；（4）吸附处理：用1mol/L的H3PO4缓冲液预处理步骤（1）中备用的凹土，在0.2mol/L、pH为 6的NaH2PO4‑Na2HPO4缓冲液中混合均匀预处理的凹土以及步骤（3）配制的乳酸球菌菌液，用棉花封住三角瓶口，放置于35℃，150r/min的摇床上进行振荡，振荡时间为80min，得到凹土对乳酸球菌菌液的最佳吸附效果。