[发明专利]一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的固定化微球及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的固定化微球及其制备方法和应用，属于生化技术领域。本发明以海藻酸钠、膨润土、壳聚糖和氯化钙为固定化材料，对邻苯二甲酸二丁酯降解菌进行固定，从而得到邻苯二甲酸二丁酯降解菌的固定化微球。考察固定化微球在28天的修复过程中对土壤中DBP去除效果，在28d时固定化微球处理组中，DBP的残留量小于20％；相比之下空白对照组DBP残留量最高为70.76％，游离菌处理组介于两者之间，DBP残留量在50％以上。本发明邻苯二甲酸二丁酯降解菌的固定，避免了土著微生物的竞争以及不利于微生物生存的土壤条件的侵害，为有效解决DBP污染土壤提供理论基础以及技术支持。

主权项

1.一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的固定化微球，包括固定化材料和邻苯二甲酸二丁酯降解菌悬液，其特征在于，所述固定化材料由以下按重量份计的组分制备而成：海藻酸钠1.00‑1.33份，膨润土0.67‑1.50份，壳聚糖0.10‑0.30份，氯化钙0.20‑0.60份；其中，所述邻苯二甲酸二丁酯降解菌的固定化微球是由以下方法制备得到：(1)溶液的配制壳聚糖溶液：将壳聚糖和乙酸按质量体积比2:5～6:5的比例溶于蒸馏水中，静置4h，然后用1mol·L‑1NaOH调节pH至5.5，最终配制成质量分数为0.25～0.75％的壳聚糖溶液；氯化钙溶液：将氯化钙溶于蒸馏水中，制备成质量分数为0.5％～1.5％的氯化钙溶液；(2)邻苯二甲酸二丁酯降解菌的固定化微球制备①将培养24h的邻苯二甲酸二丁酯降解菌培养液装入无菌离心管中，离心并去上清，留下菌体，用无菌生理盐水冲洗菌体并摇匀，制成细菌悬液，使细菌悬液的OD600＝2；②将步骤①的细菌悬液按照体积比为1:10～1:20的比例加入到海藻酸钠和膨润土的混合溶液，混匀；③用注射器吸取适量步骤②混匀后的混合液，悬空逐滴匀速滴入到氯化钙溶液中，固化30min，固定成球后将其转入壳聚糖溶液中覆膜30min，之后将小球用无菌水清洗三次，即得到硬化的邻苯二甲酸二丁酯降解菌的固定化微球；其中，海藻酸钠和膨润土的混合溶液是由以下方法制备得到：将所述重量份的海藻酸钠和膨润土溶于蒸馏水中，搅拌均匀，即得海藻酸钠与膨润土的质量分数分别为2.5％～3.3％和1.7％～3.8％的混合溶液。