[发明专利]高效液相色谱法测定塞来昔布原料药中对磺酰胺基苯肼盐酸盐含量的方法

摘要

本发明公开了一种高效液相色谱测定塞来昔布原料药中对磺酰胺基苯肼盐酸盐含量的方法，它包括如下步骤对照品溶液的制备测定高效液相色谱仪的固定相为十八烷基键合石墨碳，流动相A为10mmol/l乙酸铵水溶液‑甲醇=4555～5545，流动相B为甲醇，柱温为30℃～40℃，检测波长为218nm～222nm。吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。计算对照品溶液浓度的值为X与相应峰面积值为Y，进行线性拟合，得出线性回归方程，线性范围为99.897~599.382ng/ml。本发明应用高效液相色谱法测定塞来昔布原料药中对磺酰胺基苯肼盐酸盐，分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高，通过检测塞来昔布原料药中对磺酰胺基苯肼盐酸盐的含量，能够更好控制塞来昔布原料的质量，更好的对塞来昔布原料药中可能存在的对磺酰胺基苯肼盐酸盐杂质进行检测。

主权项

高效液相色谱测定塞来昔布原料药中对磺酰胺基苯肼盐酸盐含量的方法，其特征在于，它包括如下步骤：（1）对照品溶液的制备：称取对磺酰胺基苯肼盐酸盐对照品，加甲醇，制成每1ml含500ng的对磺酰胺基苯肼盐酸盐溶液；（2）供试品溶液的制备：取塞来昔布原料药加甲醇制成每1ml含150mg塞来昔布的溶液；（3）空白溶液的制备：甲醇；（4）测定：高效液相色谱仪的色谱柱为Thermo Hypercarb，流动相A为10mmol/L乙酸铵水溶液‑甲醇=45:55～55:45，流动相B为甲醇，柱温为30℃～40℃，流动相A初始流速为0.78～0.82ml/min，检测波长为218nm～222nm，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各15～25µl，注入高效液相色谱仪，读取数据；（5）计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数应不小于0.99，对照品溶液峰形对称，理论塔板数2000以上，供试品溶液色谱图中如有对磺酰胺基苯肼盐酸盐，应与对照品溶液中对磺酰胺基苯肼盐酸盐保留时间一致，空白溶液色谱图，无与对磺酰胺基苯肼盐酸盐对照品相同的峰出现，即空白溶液无干扰；（6）高效液相色谱测定塞来昔布原料药中对磺酰胺基苯肼盐酸盐含量的方法，所述流动相A和流动相B的运行比例变化过程见表1梯度表；（7）每克塞来昔布原料药中对磺酰胺基苯肼盐酸盐不得超过3.75µg，对磺酰胺基苯肼盐酸盐浓度范围为99.897~599.382ng/ml。