[发明专利]荧光定量PCR检测核酸分子的方法

摘要

本发明公开了一种荧光定量PCR检测核酸分子方法，包括如下步骤针对待检测样本中的病毒核酸分子的序列保守区设计特异性扩增引物和探针，将待检测样本与蛋白质变性液混合，使得待检测样本中的病毒核酸分子释放，得到混合样本，混合样本预热后与PCR反应预混液混合并置于荧光定量PCR仪中进行PCR反应。该检测方法不需要以纯化的核酸分子(DNA或RNA)为模板，待检测样本在蛋白质变性液的作用下，样本中的病毒核酸分子释放，省去了从样本中提取核酸分子步骤。与传统的方法相比，该检测方法具有实验操作简单，可缩短检测周期，节约检测成本，易于进行高通量检测的优点。

主权项

一种非疾病诊断或治疗目的的荧光定量PCR检测核酸分子方法，其特征在于，包括如下步骤：针对待检测样本中的病毒核酸分子的序列保守区设计特异性扩增引物和探针；将待检测样本与蛋白质变性液混合，所述待检测样本为未经过提取核酸分子处理的样本，所述待检测样本与所述蛋白质变性液的体积比为1：1～2，使得所述待检测样本中的病毒核酸分子释放，得到混合样本；将所述混合样本预热后与PCR反应预混液混合，所述预热的温度为55℃～70℃，所述预热的时间为10min～15min，得到反应液，所述PCR反应预混液包括所述特异性扩增引物和所述探针；以及将所述反应液置于荧光定量PCR仪中进行PCR反应；其中，所述蛋白质变性液包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、十二烷基肌酸钠、β‑巯基乙醇和蛋白酶K，所述蛋白质变性液中，所述异硫氰酸胍的浓度为0.2mol/L～2mol/L，所述柠檬酸钠的浓度为10mmol/L～30mmol/L，所述十二烷基肌酸钠的质量浓度为0.2％～1％，所述β‑巯基乙醇的浓度为0.05mol/L～0.1mol/L，所述蛋白酶K的浓度为1mg/mL～5mg/mL；所述待检测样本中的病毒核酸分子为乙肝病毒HBV，针对所述乙肝病毒HBV设计的上游引物HBV‑F的序列为SEQ ID No.1所示的序列，下游引物HBV‑R的序列为SEQ ID No.2所示的序列，探针HBV‑P的序列为SEQ ID No.3所示的序列。