[发明专利]一种以腙键连接的纳米钻石药物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种以腙键连接阿霉素的纳米钻石药物(ND-PEG-HYD-DOX)的制备方法及该药物在制备抗肿瘤药物中的应用。首先，通过聚乙二醇(H₂N-PEG-COOH)修饰纳米钻石，接着通过酰胺化反应与水合肼连接形成纳米钻石酰肼，最后通过腙键连接阿霉素从而合成目标药物ND-PEG-HYD-DOX(NPHD)。用MTT法分别检测该药物对人肝癌细胞(HepG2)、人宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)的毒性，表明该药物对不同细胞具有不同的杀伤力；且该药物能诱导肿瘤细胞凋亡且疗效略强于游离阿霉素。

主权项

一种以腙键连接的纳米钻石药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)称取真空干燥的羧基化纳米钻石，按每毫克羧基化纳米钻石加入1‑1.5mL的浓度为0.1M、pH为5.8的MES缓冲溶液中，超声分散30min形成悬浊液，再按每毫克羧基化纳米钻石加入0.2mg EDC、0.25mg NHS，室温搅拌反应6h，反应完毕后以15000rpm高速离心5min弃除上清液，得到活化羧基的纳米钻石沉淀物；接着将活化羧基的纳米钻石沉淀物迅速分散到浓度为0.1M、pH为8.4的硼酸缓冲溶液中，经过短暂超声分散形成悬浊液，再按每毫克活化羧基的纳米钻石快速加入0.3mg H₂N‑PEG‑COOH，继续室温搅拌反应12h，待反应结束，以15000rpm高速离心5min吸除上清液，并用0.1M、pH 8.4的硼酸缓冲溶液高速离心洗涤三次，获得纳米钻石‑聚乙二醇ND‑PEG‑COOH沉淀物；(2)称取干燥的ND‑PEG‑COOH沉淀物，按每毫克ND‑PEG‑COOH加入1‑1.5mL的浓度为0.1M、pH为5.8的MES缓冲溶液中，超声分散30min形成悬浊液，再按每毫克ND‑PEG‑COOH加入0.2mg EDC、0.25mg NHS，室温搅拌反应6h，反应完毕后以15000rpm高速离心5min弃除上清液，得到活化羧基的ND‑PEG‑COOH沉淀物；接着将活化羧基的ND‑PEG‑COOH迅速分散到浓度为0.1M、pH为8.4的硼酸缓冲溶液中，经过短暂超声分散形成悬浊液，再按每毫克活化的ND‑PEG‑COOH快速滴加0.01mL水合肼，继续室温搅拌反应12h，待反应结束，以15000rpm高速离心5min吸除上清液，并用0.1M、pH 8.4的硼酸缓冲溶液高速离心洗涤三次，再用无水甲醇高速离心洗涤三次，得到纳米钻石‑聚乙二醇‑水合肼ND‑PEG‑HYD沉淀物；并置于真空干燥箱中干燥；(3)按每毫克干燥的ND‑PEG‑HYD沉淀物加入2mL无水甲醇中超声分散2h，形成悬浊液，接着按ND‑PEG‑HYD与阿霉素质量比为5∶1‑2，将ND‑PEG‑HYD悬浊液逐滴滴入快速搅拌的阿霉素的甲醇溶液中，并加入0.005mL三氟乙酸与0.05mL三乙胺，通氮鼓泡30min，然后避光搅拌反应36h，待反应完毕，以15000rpm高速离心5min，并依次用pH7.2的蒸馏水、无水甲醇高速离心洗涤各五次，得到以腙键连接阿霉素的纳米药物ND‑PEG‑HYD‑DOX，真空干燥，避光保存。