[发明专利]一种基于量子点荧光共振能量转移检测基因甲基化程度的方法在审
| 申请号： | 201510263860.9 | 申请日： | 2015-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN104946741A | 公开（公告）日： | 2015-09-30 |
| 发明（设计）人： | 毛红菊;马云飞;张宏莲;金庆辉;钟新华;赵建龙 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 200050 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于量子点(QDs)荧光共振能量转移(FRET)检测基因甲基化程度的方法，包括：(1)巯基乙胺包裹的CdSe/CdS/ZnS核/壳/壳结构量子点的制备；(2)样本组织的准备；(3)基因的选择及引物设计；(4)甲基化的检测。本发明操作简便，费用低廉，灵敏度高，可以实现高通量的定性及定量检测甲基化水平，有着较强的通用性，有很好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 量子 荧光 共振 能量 转移 检测 基因 甲基化 程度 方法 | ||
【主权项】：
一种基于量子点荧光共振能量转移检测基因甲基化程度的方法，包括：(1)取三辛基氧化磷TOPO包裹的CdSe/CdS/ZnS核/壳/壳结构量子点QDs稀释于正己烷溶液；在超声条件下，逐滴加入巯基乙胺Cys溶液；超声后，量子点转入水层，弃去有机层，在水层中加入丙酮，离心沉淀后，将得到的QDs溶于Milli–Q超纯水中，制备得到Cys包裹的水溶性CdSe/CdS/ZnS QDs量子点；(2)分离提取DNA，检测浓度；取基因DNA样本，加入HpaII甲基化敏感限制性内切酶、NEBuffer和超纯水，作为实验组；再取基因DNA样本与NEBuffer和超纯水混合，作为对照组；两组DNA样本37～38℃过夜处理，加热使酶失活；(3)针对PCDHGB6、HOXA9和RASSF1A基因设计引物，序列至少包含2个CCGG；(4)将步骤(2)中的两组DNA样本经过PCR扩增引入量子点荧光共振能量转移FRET中能量受体Alexa Fluor‑647，取部分PCR产物用于凝胶电泳成像；剩余PCR产物加入SAP酶和SAP缓冲液，经过35～40℃处理1～2h，加热使酶失活；SAP处理后，取步骤(1)中的量子点溶于HEPES缓冲液进行稀释，然后取SAP处理的PCR产物与稀释后的量子点混合，置于96孔板中孵育，使用荧光光谱仪检测FRET，计算甲基化程度。
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