[发明专利]一种间充质干细胞的培养方法及用途

摘要

本发明公开了属于细胞生物学技术领域的一种间充质干细胞的培养方法及用途。本发明的方法首先通过对皮肤真皮层的获取和前处理，然后进行贴壁和扩大培养，培养中加入自主研制的营养液，最终获得间充质干细胞。该间充质干细胞具有分化为皮肤真皮组织和类肺泡器官的潜能。为将来实现皮肤移植和肺泡器官移植打下了良好的基础。

主权项

间充质干细胞在构建肺泡中的应用，其特征在于，所述间充质干细胞按照如下步骤进行培养：(1)将皮肤的真皮层组织取出，平铺在平皿上，采用清洗液和消毒液清洗真皮层组织；(2)向平皿中缓慢加入间充质干细胞培养基，放入培养箱进行培养，培养3‑5天加入占间充质干细胞培养基质量5‑10％的营养液，培养至第8‑10天更换一次间充质干细胞培养基和营养液，此后每隔2‑4天更换一次间充质干细胞培养基和营养液；(3)当平皿内的贴壁细胞融合率达到60‑70％时，使用消化酶使贴壁细胞脱离平皿底部，离心，去除上清液，加入间充质干细胞培养基重新悬浮，再接种于细胞培养瓶中进行传代并扩增培养，每隔1‑2天换间充质干细胞培养基一次，至融合率达到80‑95％，得到皮肤间充质干细胞；所述清洗液为PBS、BSS、生理盐水或者去离子水；所述消毒液为双氧水、70％乙醇水溶液或者酒精；所述营养液包含如下质量分数的组分：肌醇0.3％、白细胞介素0.15％、转铁蛋白0.4％、葡萄糖1.5％、丙酮酸钠0.6％、乳酸钠0.6％、干细胞生长因子0.15％、余量为去离子水；所述构建步骤如下：将培养至三代或三代以上的间充质干细胞用胰酶消化为单细胞悬液，计数后用间充质干细胞培养基重悬，并与等体积4℃解冻的Matrigel混合，接种于24孔板，置于37℃细胞培养箱，20分钟后，待Matrigel凝固，加入间充质干细胞培养基，每孔接种2.5×105间充质干细胞，与50μL Matrigel混合后接种，接种成功后，隔天用肺泡培养基换液，体外培养1天后， 细胞聚集成类肺泡形状，3天后，可见肺泡形成，6‑10天后肺泡长到最大；所述肺泡培养基的组成成分如下：3‑10wt％BSA，3‑10％FBS，碱性成纤维因子0.1‑2％，白细胞介素‑80.1‑2％，桂皮鞣质D10.1‑2％，75‑90％去离子水。