[发明专利]一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法

摘要

本发明提供了一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，采用高效液相色谱法测定，其色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑四氢呋喃为流动相A，以磷酸溶液（含磷酸二氢钾）为流动相B，按时间进行程序梯度洗脱，采用样品与对照品混合法进行测定，其目标成分分离度、峰形、拖尾因子均有了显著改善，且专属性、线性、检测限、耐用性均好。

主权项

一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：用高效液相色谱法测定附子中双酯型生物碱含量，流动相按时间进行梯度洗脱，采用标准加入法进行测定；色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为250×4.6mm，5μm；以乙腈：四氢呋喃＝20：20至30：10为流动相A，以含0.02％‑0.3％磷酸的0.01‑0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，按时间进行梯度洗脱，0分钟至80分钟流动相B由90％至70％，检测波长为222‑242nm，理论板数按乌头碱峰计算不低于8000；对照品溶液制备：取新乌头碱对照品、次乌头碱对照品、乌头碱对照品适量，精密称定，分别加乙腈制成每1ml含0.05‑0.5mg的溶液，作为对照品贮备液，精密量取上述三种对照品贮备液各5ml，置50ml量瓶中，加0.1％磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得；固相萃取柱系统适用性试验：精密量取对照品贮备液各3ml，混匀，室温减压回收至干，残渣精密加入0.1mol/L盐酸溶液50ml使溶解，精密量取5ml，置于处理好的固相萃取柱上，依次以0.1mol/L盐酸溶液、甲醇、乙腈各5ml洗脱，弃去洗脱液，放置5分钟，继用乙腈：浓氨试液＝90：10的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液，于40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈：0.1％磷酸溶液＝30：70的混合溶液3ml使溶解，滤过，取续滤液作为固相萃取柱系统适用性试验溶液；所述固相萃取柱以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150‑200mg，容量为4‑10ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱；分别精密吸取上述固相萃取柱系统适用性试验溶液和对照品溶液各5‑30μl，注入液相色谱仪，测定，计算系统适用性试验溶液和对照品溶液各相应成分峰面积比值，不得小于0.95；供试品溶液的制备：取检品，称取0.5‑5g，置具塞锥形瓶中，加乙腈：浓氨试液＝90：10的混合溶液25ml，超声处理10‑50分钟，滤过，滤液于40℃以下减压回收溶剂至干，残渣加0.1mol/L盐酸溶液10ml使溶解，滤过，照固相萃取柱系统适用性试验项下的方法，自“置于处理好的固相萃取柱上”起，依法操作，得供试品溶液，量取对照品溶液与供试品溶液配制成分别含新乌头碱、次乌头碱、乌头碱2‑18μg/ml的混合待测液；测定法：分别精密吸取对照品溶液与混合待测液各5‑30μl，注入液相色谱仪，测定，即得。