[发明专利]CRISPR-Cas9特异性敲除人PCSK9基因的方法以及用于特异性靶向PCSK9基因的sgRNA在审
| 申请号： | 201510240981.1 | 申请日： | 2015-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN105886498A | 公开（公告）日： | 2016-08-24 |
| 发明（设计）人： | 沈志荣;王凤超 | 申请（专利权）人： | 沈志荣 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/85;C12N15/57 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100035 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及CRISPR-Cas9特异性敲除人PCSK9基因的方法以及用于特异性靶向PCSK9基因的sgRNA，通过云端高通量计算设计、合成了一组利用CRISPR-Cas9特异性敲除人PCSK9基因中特异性靶向PCSK9基因的sgRNA，并分别将该sgRNA与线性的pCG-U6-SgRNA质粒连接成载体，将一对正向和方向sgRNA寡核苷酸载体与pCG-NLS-FLAG-Cas9质粒一起成功转染细胞即可实现PCSK9基因的敲除，sgRNA只需要小量合成多核苷酸片断，就能大批量生产的优点，该制备方法简单易行、sgRNA靶向性好，CRISPR-Cas9系统的敲除效率高。 | ||
| 搜索关键词： | crispr cas9 特异性 pcsk9 基因 方法 以及 用于 靶向 sgrna | ||
【主权项】：
CRISPR‑Cas9特异性敲除人PCSK9基因的方法以及用于特异性靶向PCSK9基因的sgRNA，其特征在于：(1)所述SgRNA在PCSK9基因上的靶序列符合5’‑GGN(19)GG、5’‑GN(20)GG或者5’‑N(21)GG的序列排列规则；(2)所述SgRNA在PCSK9基因上的靶序列位于基因的外显子；(3)所述SgRNA在PCSK9基因上的靶序列位于不同的各种剪切形式的共有外显子上；(4)所述SgRNA在PCSK9基因上的靶序列是唯一的。
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