[发明专利]一种橡胶树体细胞胚胎发生和植株再生的方法

摘要

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种橡胶树体细胞胚胎发生和植株再生的方法。本发明的特征包括外植体的选取和剥离、愈伤组织诱导、胚状体诱导和植株诱导再生。方法是选取橡胶树叶片古铜期或淡绿期的芽条或芽条摘顶后侧芽萌发3‑4周的幼嫩侧枝，切成1‑1.5cm带有腋芽的茎段，经适当灭菌，将消毒的茎段于无菌条件剥离出的腋芽点为外植体，经愈伤和体胚诱导获得再生植株。本发明克服了传统花药培养和内珠被培养中外植体取材时间短和基因型的制约的缺陷，本发明建立的橡胶树再生体系为橡胶树组培苗工厂化生产以及遗传转化体系提供了新的途径。

主权项

一种橡胶树体细胞胚胎发生和植株再生的方法，其特征在于按照以下步骤进行：(1)外植体选取、消毒和剥离：选取橡胶树叶片古铜期或淡绿期的芽条或芽条摘顶后由其侧芽萌发3‑4周龄的幼嫩侧枝，切成1‑1.5cm带有腋芽的茎段，用洗洁精清洗5分钟，再用自来水冲洗30分钟，70％酒精消毒30‑60秒，0.15％升汞溶液消毒8‑12分钟，无菌水冲洗5遍，用无菌滤纸吸干，将消毒后的茎段于无菌条件下置于体视显微镜中，剥离得到腋芽点外植体；(2)愈伤组织诱导：将剥离得到的腋芽点外植体接种于愈伤组织诱导培养基中，于24‑28℃暗培养50‑70d；所述愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，附加2，4‑D 10mg/L，萘乙酸2mg/L，6‑苄基氨基嘌呤0.5mg/L，蔗糖40g/L，椰子水5％(V/V)，Phytagel 2.2g/L，补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2；(3)体胚诱导：将愈伤组织接种于胚状体诱导培养基中，于24‑28℃暗培养50‑70天；所述的胚状体诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，将MS培养基中大量元素的浓度降为80％，微量元素浓度增加1倍，附加6‑苄基氨基嘌呤0.5mg/L，细胞激动素2mg/L，萘乙酸1mg/L,赤霉素0.5mg/L，活性碳0.1％(W/V)，蔗糖40g/L，Phytagel 2.2g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2；(4)植株诱导：将成熟的胚状体接种于植株诱导培养基中，于24‑28℃，光照强度为2000Lux的光照条件下培养40‑50天；所述的植株诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，将MS培养基中大量元素的浓度降为80％，附加细胞激动素1mg/L，赤霉素1mg/L，活性碳0.1％(W/V)，蔗糖30g/L，Phytagel 2.2g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2。