[发明专利]尼帕病毒和猪瘟病毒二重荧光RT-PCR检测试剂及其制备方法与用途

摘要

本发明公开了一种尼帕病毒和猪瘟病毒的二重荧光RT-PCR检测试剂及其制备方法与用途，设计合成了二套分别针对尼帕病毒M基因和猪瘟病毒5’UTR基因的特异性引物及Taqman探针和阳性对照，并利用这二套引物及探针建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的二重荧光RT-PCR检测体系，可在3～4小时内从被检样本中快速、准确、特异、安全、简便地同时检出尼帕病毒和猪瘟病毒核酸，可用于同时检测猪及其相关样本中微量尼帕病毒和猪瘟病毒的核酸。

主权项

一种尼帕病毒和猪瘟病毒的二重荧光RT‑PCR检测试剂，其特征在于，包括用于分别检测尼帕病毒M基因和猪瘟病毒5’UTR基因的二对特异性引物、二条特异性探针和二个阳性对照，扩增目标长度分别为79bp和77bp，引物和探针序列为：尼帕病毒上游引物：NIPHA‑M‑F:5’‑GCTCAACAGATTGACCTGGAAC‑3’ SEQ ID NO.1下游引物：NIPHA‑M‑R：5’‑AACAGAAGGCTGCAACACAGC‑3’ SEQ ID NO.2探针：NIPHA‑M‑P:5’‑FAM‑CTCGGCTGATCTCACA‑3’‑MGB SEQ ID NO.3阳性对照：GATGGACATCAATCCTTGGCTCAACAGATTGACCTGGAACAACAGTTGTGAGATCAGCCGAGTAGCAGCTGTGTTGCAGCCTTCTGTTCCAAGAGAGTTCATGATCTATGATGATGTCTTCSEQ ID NO.4猪瘟病毒上游引物：CSFV‑5’UTR‑F:5’‑GTTCGACGTGAGCAGAAGCC‑3’ SEQ ID NO.9下游引物：CSFV‑5’UTR‑R:5’‑CCGCTAGGGTTAAGGTGTGTC‑3’ SEQ ID NO.10探针：CSFV‑5’UTR‑P:5’‑VIC‑ACCACCATAGCAATGAGCAAGG‑MGB‑3’ SEQ ID NO.11阳性对照：CSFV‑5’UTR:CTGGGTGGTCTAAGTCCTGAGTACAGGACAGTCGTCAGTAGTTCGACGTGAGCAGAAGCCCACCTCGAGATGCTATGTGGACGAGGGCATGCCCAAGACACACCTTAACCCTAGCGG                                                         SEQ ID NO.12。