[发明专利]一种从茶树鲜叶中萃取、纯化、鉴定花青素的方法

摘要

本发明公开了一种从茶树鲜叶中萃取、纯化、鉴定花青素的方法，其特征在于包括以下步骤A.样品破碎；B.浸提；C.浓缩处理；D.过滤处理；E.固相萃取；F.浓缩处理；G.酸解；H.HPLC检测。本发明与现有技术相比的优点是1、茶叶含有非常高的酚类物质，极易氧化花色素苷。本方法能有效地克服其它酚类物质的干扰，得到高纯度的花色苷。2、该方法从茶树鲜叶中提取花色苷的损失率低，重现性好。3、该方法适用于所有茶树品种的花色苷的定性、定量检测。

主权项

一种从茶树鲜叶中萃取、纯化、鉴定花青素的方法，其特征在于：包括以下步骤：A.样品破碎：准确称量采摘新鲜紫色茶树的一芽二叶5g，加液氮研磨后转至50ml离心管；B.浸提：加20ml 1％的HCL‑MeOH到样品，置于冰箱4箱冷藏室静止浸提；2h后离心，转速9000r/min，离心时间10min；吸出上清液移至新的50ml离心管；再加20ml 1％HCL‑MeOH到样品进行二次浸提，2h后离心，转速9000r/min，离心时间10min，转移上清液；最后再加10ml 1％HCL‑MeOH进行第三次浸提，12h后离心，转移上清液；C.浓缩处理：利用旋转蒸发仪对获得的浸提液进行浓缩；最后得到体积为25～30ml的浓缩液；D.过滤处理：将浓缩液经0.45μm有机相针筒式滤膜过滤器过滤；E.固相萃取：使用反式固相萃取柱对花色苷进行萃取；萃取流程如下：柱活化，5ml 0.01％HCL‑MeOH，重复一次；平衡，5ml0.01％HCL；上样；淋洗，5ml 0.01％HCL，重复一次，接着加5ml正己烷，重复一次；洗脱，加5ml 0.01％HCL‑MeOH，收集洗脱液，洗脱3次；F.浓缩处理：利用旋转蒸发仪将固相萃取获得的提取液进行浓缩，浓缩后体积用0.01％HCL‑MeOH定容到10ml；G.酸解：移取200μL样品到1.5ml离心管，加入400μL5mol/L HCl，用Parafilm封口膜密封；恒温箱90℃处理30min，结束后立即放冰上；H.HPLC检测：进行HPLC检测，HPLC检测硬件条件如下：HPLC系统为Agilent 1260，色谱柱ZORBAX SB‑C18；洗脱条件：流动相A，水/乙腈/甲酸，87/3/10，v/v/v；流动相B，乙腈；0min，0％B；5min，5％B；10min，14％B；30min，30％B；检测条件：上样量，10μl；柱温，35℃；检测波长520nm；标准样品：飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、锦葵色素、芍药色素均购自美国ChromaDex公司。