[发明专利]金枪鱼暗色肉蛋白抗氧化铁螯合肽制备方法

摘要

本发明公开了一种金枪鱼暗色肉蛋白抗氧化铁螯合肽及其制备方法，该抗氧化铁螯合肽的氨基酸序列为Tyr‑Ile‑Val‑Tyr‑Trp，ESI‑MS检测分子量为742.84 Da，制备时以金枪鱼暗色肉作为原料，经过脱脂、中性蛋白酶酶解、超滤、凝胶过滤层析和反相高效液相纯化，得抗氧化铁螯合肽Tyr‑Ile‑Val‑Tyr‑Trp。

主权项

一种权利要求1所述的金枪鱼暗色肉蛋白抗氧化铁螯合肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）金枪鱼暗色肉的预处理：取金枪鱼暗色肉用高速组织捣碎机处理成匀浆，加热至95～100℃后保温10～15min，然后降至室温，按照料液比1g:3～5mL加入异丙醇，室温下脱脂20～24 h，然后于4℃、9 000 rpm离心25～30min除去异丙醇，收集脱脂金枪鱼暗色肉固形物，即为脱脂金枪鱼暗色肉蛋白；2）脱脂金枪鱼暗色肉蛋白的酶解：以脱脂金枪鱼暗色肉蛋白作为原料，按固液比1 g:20～25mL加入磷酸盐缓冲液（pH 6.5～7.5），得混合液；将混合液温度升至55～65 ℃搅拌预热5～10 min，按照脱脂金枪鱼暗色肉质量的1.5～2.0%加入蛋白酶，酶解温度为55～65 ℃，酶解时间3～5 h后，将溶液升温至90～95℃，并于此温度保持10～15min，10 000g离心20～25 min，取上清液，即为酶解产物；3）金枪鱼暗色肉蛋白抗氧化铁螯合肽的制备：将制备的酶解产物采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，得超滤酶解液，再将酶解液依次经凝胶过滤层析和反相高效液相色谱纯化，得到抗氧化铁螯合肽。