[发明专利]具有神经多肽诱导成骨活性的骨修复材料的制造方法

摘要

本发明涉及具有神经多肽诱导成骨活性的骨修复材料的制造方法，包括制备自固化磷酸钙粉剂；制备I型胶原溶液；制备具有纳米级立体网状结构的I型胶原明胶；制备人工合成神经多肽P物质；制备枸橼酸盐缓冲液；枸橼酸盐缓冲液溶解P物质制备生物活性固化液；磷酸钙粉剂与生物活性固化液混合调拌，加入条状明胶，制成骨修复材料。该方法通过仿生骨松质结构构建自固化骨修复材料，明胶构建材料内部通道，利于组织液渗透和新生血管长入，固化液加入P物质，可使材料具备骨再生诱导活性，自主诱导体内干细胞动员，制备的骨修复材料可随意塑形，适于各种复杂形态骨缺损，可促进骨修复材料在体内向正常骨组织转化，提高修复效率和成功率。

主权项

一种具有神经多肽诱导成骨活性的骨修复材料的制造方法，其包括以下步骤：(1)制备自固化磷酸钙粉剂，具体方法为：按照1∶2的摩尔比混合CaCO3与CaHPO4，然后再将混合后的物质在1100摄氏度下烧结5小时，制得磷酸四钙材料，通过研钵破碎所得磷酸四钙材料，然后再用355μm孔径筛进行筛分，筛分之后再用球磨机研磨10分钟制成粉末，并将所述粉末按照1∶3的摩尔比与CaHPO4混合搅拌30秒，制成自固化磷酸钙粉剂；(2)制备I型胶原溶液，具体方法为：将大鼠鼠尾腱按照质量体积浓度3％W/V加入5mol/L的乙酸溶液中，并在4℃温度下磁力搅拌溶解，然后将溶液用半透膜双蒸水透析48小时去除乙酸成分，在低温高速离心机中在‑20℃、4000转/分的条件下离心15分钟，吸取上清，制成I型胶原溶液；(3)制备具有纳米级立体网状结构的I型胶原条状明胶，具体方法为；将I型胶原溶液置于平底物料盘中，使液面高度为5mm，转移至真空冷冻干燥机中，在‑60℃下冻干25小时，制成具有纳米网状结构的冻干胶原明胶，再剪切制成1mm×1mm×5mm的条状明胶；(4)制备人工合成神经多肽P物质，具体方法为：使用自动多肽合成仪按照以下氨基酸序列Arg‑Pro‑Lys‑Pro‑Gln‑Gln‑Phe‑Phe‑Gly‑Leu‑Met‑NH2人工合成神经多肽P物质；(5)制备枸橼酸盐缓冲液，具体方法为：称取21.01g的分子式为C6H8O7·H2O的枸橼酸溶于1000ml蒸馏水中，制备0.1mol/L的枸橼酸溶液；称取29.41g的分子式为C6H5Na3O7·2H2O的枸橼酸钠溶于1000ml蒸馏水中，制备0.1mol/L的枸橼酸钠溶液；取9ml枸橼酸溶液和41ml枸橼酸钠溶液加入450ml蒸馏水中，调溶液pH值为7.0，制成枸橼酸盐缓冲液；(6)用枸橼酸盐缓冲液溶解神经多肽P物质制备生物活性固化液，具体方法为：超滤法消毒枸橼酸盐缓冲液，按照浓度1mg/ml溶解神经多肽P物质，制成生物活性固化液；(7)自固化磷酸钙粉剂与生物活性固化液按照质量体积比例为0.18g∶0.08ml混合调拌，制成自固化磷酸钙糊剂，并在自固化磷酸钙糊剂中按照体积比1∶1加入I型胶原条状明胶，调拌使I型胶原条状明胶分散在糊剂中，即制得具有神经多肽诱导活性的骨修复材料。