[发明专利]一种分离5(6)‑羧基罗丹明异构体的方法

摘要

本发明公开一种分离5(6)‑羧基罗丹明异构体的方法，包括如下步骤将5‑羧基罗丹明和6‑羧基罗丹明的混合物溶于溶剂中，配制成一定浓度的溶液，一定温度下超声分散后获得样品溶液；制备一定浓度的琼脂糖凝胶液，将其冷却到65℃后小心地倒入电泳槽内的有机玻璃内槽中，添加Tris碱缓冲溶液至没过凝胶板为止；将步骤（1）的样品溶液加到样品孔中，控制一定的电场强度，对凝胶板通电进行电泳，当凝胶上原有的一条样品谱带在移动中分裂为两条紫红色谱带后，结束电泳。取出凝胶板后，用小刀将两个谱带的凝胶切割分离，分别将两个胶带研磨后用有机溶剂萃取，即可分别得到异构纯的5‑羧基罗丹明化合物、6‑羧基罗丹明化合物。具有简单、方便、经济等特点。

主权项

一种分离5(6)‑羧基罗丹明异构体的方法，包括如下步骤：（1）样品的准备将5‑羧基罗丹明和6‑羧基罗丹明的混合物溶于溶剂中，配制成一定浓度的溶液，将其在一定温度下超声分散一定时间后获得样品溶液，备用；（2）凝胶的制备制备一定浓度的琼脂糖凝胶液，将其冷却到65℃后小心地倒入电泳槽内的有机玻璃内槽中，添加一定pH值的Tris碱缓冲溶液至没过凝胶板为止；（3）电泳分离用移液器将步骤（1）的样品溶液加到样品孔中，控制一定的电场强度，对凝胶板通电进行电泳，当凝胶上原有的一条样品谱带在移动中分裂为两条紫红色谱带后，结束电泳；（4）样品后处理取出凝胶板后，用小刀将两个谱带的凝胶切割分离，分别将两个胶带研磨后用有机溶剂萃取，浓缩萃取液即可分别得到异构纯的5‑羧基罗丹明化合物、6‑羧基罗丹明化合物；所述的5‑羧基罗丹明异构体或6‑羧基罗丹明异构体具有下列结构通式：其中：R1、R2、R3同时为氢，或者R1、R2、R3选自氢、2‑6个碳原子烷基中的一种；所述步骤（1）中溶剂为无水乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、甲醇或含有上述溶剂与水的任意比率的水溶液；所述步骤（1）中样品溶液的浓度在0.02 ~4 mol/L之间；所述步骤（1）中所述的一定温度在10~50℃之间；步骤（1）中所述的一定时间在10~120分钟之间；所述步骤（2）中琼脂糖凝胶液的浓度在0.5～2wt%之间；所述步骤（2）中Tris碱缓冲溶液的pH值在4~10.5之间，Tris碱缓冲溶液的浓度为0.04~2.00 mol/L。