[发明专利]脐带血免疫细胞在制备治疗银屑病药物中的应用

摘要

本发明公开了脐带血免疫细胞在制备治疗银屑病药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明利用新生儿脐带血中的免疫细胞，在体外定向扩增之后，再输注到患者体内来纠正患者体内免疫偏倚或缺陷。经过试验性治疗，结果证实脐带血免疫细胞对银屑病患者的治疗效果明显。本发明的治疗方法简便，易于施治，患者的依从性好，无明显的副作用，更重要的是本发明的治疗方法能够达到临床治愈水平，患者能够得到长期的临床无病缓解。

主权项

脐带血免疫细胞作为唯一有效成分在制备治疗银屑病药物中的应用，其中，所述脐带血免疫细胞采用以下方法制备：(1)脐带血的采集对离断后的胎儿脐带清洁后进行采血，采血前使采血管壁充分覆盖抗凝剂，然后将采血袋置于低于脐带的位置，将采血针刺入脐静脉充盈处的下端，利用重力及挤压使脐带血进入采血袋中，边采集脐血边轻轻摇晃采血袋，使脐带血与抗凝剂充分混和，当脐静脉塌陷、变白或者采集袋中的脐带血停止流入时即可终止采集脐带血，采集的脐带血4℃冰箱暂存，24小时内，经由配备有恒温设备的转运车运至GMP实验室进行分离和培养；(2)脐带血单核细胞的制备用移液管吸取DPBS加入到步骤(1)采集的脐带血中，稀释脐带血细胞，将脐带血细胞稀释液，加入装有淋巴细胞分离液的离心管中，离心后，吸取淋巴细胞分离液上方的白膜层细胞，转入一个新的离心管中，加入ALYS505N‑0无血清细胞培养基，离心后弃上清，保留离心管底部的细胞沉淀，即得到脐带血单核细胞；(3)单核细胞的诱导和扩增将步骤(2)收集到的单个核细胞加入到含有IL‑12的ALYS505N‑0无血清细胞培养液中，制成细胞悬液，并转移到75cm2细胞培养瓶中，同时加入IL‑12，置于37℃饱和湿度、5％CO2培养箱中连续培养，培养至第3天，补充含有IL‑2的ALYS505N‑0无血清细胞培养液，待显微镜下观察细胞状态良好，细胞密度达到或接近100％铺壁率时，轻轻吹打成细胞悬液，将悬液转移至225cm2细胞培养瓶中，继续培养，每2‑3天加液一次，待细胞密度达到或接近100％铺壁率时，轻轻吹打成细胞悬液，将悬液分装，并加入含有IL‑2的ALYS505N‑0无血清细胞培养基继续培养，待细胞培养至第14天，轻轻吹打培养瓶中的培养物，制成单细胞悬液，转移悬液至离心管中，室温离心，细胞沉降下来后弃掉上清，加入生理盐水重悬细胞，再次离心后弃上清，如此洗涤细胞3次，最后重悬于生理盐水中。