[发明专利]一种观察肿瘤血管微循环的裸鼠皮肤褶皱模型的建立方法

摘要

本发明公开了一种观察肿瘤血管微循环的裸鼠皮肤褶皱模型的建立方法，其特征在于：所述的方法按照以下步骤进行：取对数期的CBRH-7919肝癌细胞，将其用0.25%的胰蛋白酶消化后，离心浓缩获得CBRH-7919肝癌细胞悬液，然后将一定量的CBRH-7919肝癌细胞悬液注射到裸鼠表皮下，保证进入裸鼠表皮下的CBRH-7919肝癌细胞的数量范围在5×10⁵至4×10⁶个/ml；注射完成后2-3天取形成肿瘤瘤体的裸鼠，在肿瘤瘤体生长的一面建立皮肤褶皱模型。

主权项

一种观察肿瘤血管微循环的裸鼠皮肤褶皱模型的建立方法，其特征在于：所述的方法按照以下步骤进行：取对数期的CBRH‑7919肝癌细胞，将其用0.25%的胰蛋白酶消化后，离心浓缩获得CBRH‑7919肝癌细胞悬液，然后将一定量的CBRH‑7919肝癌细胞悬液注射到裸鼠表皮下，保证进入裸鼠表皮下的CBRH‑7919肝癌细胞的数量范围在5×10⁵至4×10⁶个/ml；注射完成后2‑3天取形成肿瘤瘤体的裸鼠，在肿瘤瘤体生长的一面建立皮肤褶皱模型，具体方法如下：麻醉：将戊巴比妥钠用无菌生理盐水配制成1%的无菌溶液，根据体重按45mg/kg行腹腔内注射麻醉，若术中麻醉过浅可追加0.1ml的无菌溶液于腹腔中，备皮：应用脱毛剂将裸鼠背部的微绒毛彻底清除干净，术前准备：将裸鼠放置于操作台上，沿其脊柱捏起裸鼠背部皱褶皮肤，取其头部中央皮皱部与尾部正中延长线之间的正中线位置做一标记，在正中线两侧分别取两点，该两点与正中线中点之间的距离为2cm，分别用2根无菌丝线从该两点穿过皮肤皱褶，并利用这2根无菌丝线拉起实验鼠皮肤，术者视线垂直于实验鼠正中线，在对侧透射光源的照射下，看清主要血管走向及位置并做标记，安装小室套件：将第一片小室架放于裸鼠背靠近术者一侧的背部正中皮肤上缘处，用无菌丝线将其缝扎固定，后在透射性光源的照射下，用记号笔根据已安装小室架的一侧的圆形视窗区的范围，标记出对侧相对应的视窗区范围，拆除术前准备时用于悬挂裸鼠皮肤的丝线，然后让实验裸鼠朝向背离术者一侧侧卧，将实验裸鼠放置于万向支架显微镜下，用无菌纱布垫于皱褶皮肤下，使视窗区处于水平，并调节显微镜对焦与标记区域，应用无菌显微外科手术器材在显微镜观察下去除标记侧的皮肤、皮下组织及双侧牵拉肌，切除范围为直径15mm的圆形面积，切除了视野区的皮肤后，把玻璃架放置于视窗区中央，将第二片小室架固定到对应的位置，两片套件之间由防挤压垫片分隔开以避免压迫供血血管，后用螺母和缝线固定好两片小室架，上述操作过程中，视窗区域要用温生理盐水保持湿润，在两片小室架中的玻璃架内覆盖一层可拆卸的无菌圆形盖玻片并固定，且在放置盖玻片前向玻璃架内滴足量的温生理盐水。