[发明专利]一种细胞内位点特异性共价标记RNA的新方法

摘要

本发明涉及一种在体外或细胞内位点特异性共价标记RNA的新方法。该方法通过在体外或细胞内引入tRNA^lle2‑agmatidine合成酶(简称Tias，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示)和闪烁古生球菌tRNA^lle2(SEQ ID NO：3)或其衍生核苷酸序列，使Tias特异识别转录组中AftRNA^lle2的特定序列，促使含有叠氮化物或炔基官能团的小分子与含有tRNA^lle2标签的目标RNA之间产生序列及位点特异性结合，进而通过荧光染料与官能团的化学反应来实现目标RNA的特异性标记及成像。本发明还涉及在细胞内位点特异性共价标记靶标RNA的试剂盒，其包含tRNA^lle2‑agmatidine合成酶和tRNA^lle2‑3‑5。

主权项

1.一种能够在细胞内位点特异性共价标记靶标RNA的试剂盒，所述试剂盒包括：(1)tRNA^Ile2‑agmatidine合成酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2，(2)tRNA^Ile2或其衍生的核苷酸序列，其中所述tRNA^Ile2的核苷酸序列为SEQ ID NO:3，(3)底物，所述底物为胍丁胺或胍丁胺类似物，其中所述胍丁胺类似物选自N‑(4‑氨基丁基)‑2‑叠氮基乙酰胺、炔丙胺或丁‑3‑炔‑1‑基(4‑氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯，(4)反应缓冲液；(5)ATP储液；(6)DTT储液；(7)荧光染料，其选自BCN‑FITC、BCN‑Cy5或Sulfo‑Cy5‑azide，其中所述tRNA^Ile2衍生的核苷酸序列为tRNA^Ile2‑3‑5，其核苷酸序列为SEQ ID NO:5，其结构如式I所示：