[发明专利]针对柑橘全爪螨进行基因功能验证的方法有效
| 申请号： | 201510038090.8 | 申请日： | 2015-01-26 |
| 公开（公告）号： | CN104651499B | 公开（公告）日： | 2018-10-23 |
| 发明（设计）人： | 王进军;廖重宇;夏文凯;冯英财;李刚;沈晓敏 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/6888;C12N15/113;C12N15/10 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所(普通合伙) 50211 | 代理人： | 谭春艳 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种针对柑橘全爪螨进行基因功能验证的方法，包括如下步骤：1)准备目的基因dsRNA溶液：根据要抑制的目的基因合成相应的dsRNA溶液；2)用柑橘叶片制作叶碟，清洗干净；3)将叶碟干燥处理至叶碟明显皱缩，用离心管盖盛装步骤1中制备好的dsRNA溶液，将叶碟漂浮于dsRNA溶液上至恢复原状不再皱缩；4)将柑橘全爪螨置于漂浮的叶碟上，将叶碟放入培养箱，在22‑28℃、湿度55‑65％和光照:黑暗为14h:10h的条件下培养60‑80小时；5)培养结束后，收集柑橘全爪螨虫体提取RNA，检测步骤1中的目的基因的表达情况。本发明解决了柑橘全爪螨目前没有有效的dsRNA导入方法的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 叶碟 柑橘全爪螨 目的基因 基因功能验证 皱缩 柑橘 漂浮 干燥处理 恢复原状 盛装步骤 叶片制作 提取RNA 离心管 培养箱 放入 螨虫 制备 光照 清洗 合成 黑暗 检测 | ||
【主权项】：
1.一种针对柑橘全爪螨进行基因功能验证的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)准备目的基因dsRNA溶液：根据要抑制的目的基因制备相应的dsRNA溶液；2)用柑橘叶片制作叶碟，用无核酸酶水清洗干净；3)将清洗后的叶碟干燥处理至叶碟明显皱缩，用离心管盖盛装步骤1)中制备好的dsRNA溶液，将叶碟漂浮于dsRNA溶液上，让叶碟吸收dsRNA溶液至恢复原状不再皱缩；4)将柑橘全爪螨置于步骤3)中漂浮的叶碟上，每个直径1‑2cm的叶碟上放20‑30头柑橘全爪螨，将叶碟连同离心管盖放入培养箱，用带透气孔的盖子盖住离心管盖，在22‑28℃、湿度55‑65％和光照:黑暗为14h:10h的条件下培养60‑80小时；5)培养结束后，收集柑橘全爪螨虫体提取RNA，检测步骤1)中的目的基因的表达情况。
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