[发明专利]一种基于银纳米粒子四面体拉曼多重检测的方法

摘要

一种基于银纳米粒子四面体拉曼多重检测的方法，属于分析化学技术领域。本发明利用DNA介导纳米粒子自组装技术成功组装得到银纳米粒子四面体，利用四面体的特殊空间构型，通过在银纳米粒子四面体中引入三段含有待测物SDM、AFM1、OTA核酸适配体片段的DNA和三种信标分子，成功构建了基于银纳米粒子四面体的拉曼多重检测体系，当存在待测物时，四面体的空间构型发生改变引起拉曼信号的变化，进而进行检测；三种信标分子拉曼信号的变化对应于三种目标物的浓度，从而实现了对三种目标物SDM，AFM1和OTA的同时检测。该方法具有极高的灵敏度与良好的特异性，并且避免了纳米粒子无序聚集对检测结果的影响，更加有利于拉曼传感检测技术在实际中的应用。

主权项

一种基于银纳米粒子四面体拉曼多重检测SDM，AFM1，OTA的方法，首先合成10nm粒径银纳米粒子AgNP；其特征在于利用含有待测物SDM，AFM1，OTA核酸适配体片段的DNA组装得到银纳米粒子四面体，当存在待测物时，四面体的空间构型发生改变引起拉曼信号的变化，进而进行检测；工艺步骤为：（1）银纳米粒子修饰DNA：上述合成的银纳米粒子AgNP分别和巯基修饰的 DNA1，DNA2，DNA3，DNA4 进行偶联形成AgNP‑DNA1，AgNP‑DNA2，AgNP‑DNA3，AgNP‑DNA4复合体；构建银纳米粒子四面体的核酸序列：DNA1：5’‑SH‑TTTATTGAGG GCAACGAGTG TTTATAGACT TTCCCTATTA GAAGGTCTCA GGTGCGCGTT TCCAGCCATA CCTTAGGTAC TTCTGCC‑3’；DNA2：5’ ‑SH ‑TTTCGCGCAC CTGAGACCTT CTAATAGGGT TTGCGACAGT CGTTCAACTA GAATGCCCTT TGGGCTGTTC CGGGTGTGGC TCGTCGG‑3’；DNA3：5’ ‑SH ‑TTTACTGCTA GAGATTTTCC ACATGGCTAT TTGATCGGGT GTGGGTGGCG TAAAGGGAGC ATACATTTCC GACGAGCCAC ACCCGGAACA GCCC‑3’；DNA4：5’ ‑SH ‑ TTTGTCTATA AACACTCGTT GCCCTCAATT TTTGACGATC TCTAAAAGGT GTACCGATTT TGGGCATTCT AGTTGAACGA CTGTCGC ‑3’：（2）拉曼信标分子的修饰：将三种拉曼信标分子4‑氨基苯硫酚4‑ATP，4‑硝基苯硫醇NTP、 4‑甲氧基苄硫醇MATT对应修饰到AgNP‑DNA1，AgNP‑DNA2，AgNP‑DNA3表面得到AgNP‑DNA1‑ATP，AgNP‑DNA2‑NTP，AgNP‑DNA3‑MATT；（3）银纳米粒子四面体的组装：将上述制备的AgNP‑DNA1‑ATP，AgNP‑DNA2‑NTP，AgNP‑DNA3‑MATT，AgNP‑DNA4混合，利用碱基互补配对杂交得到银纳米粒子四面体；（4）基于银纳米粒子四面体拉曼传感器的构建与应用：向步骤（3）制备出的银纳米粒子四面体体系中加入一系列不同浓度的SDM、AFM1、OTA标准溶液，分别测定其拉曼信号，根据三种不同信标的拉曼信号强度与待测物浓度建立标准曲线。