[发明专利]一种福寿螺血细胞的原代培养方法

摘要

本发明涉及一种福寿螺血细胞的原代培养方法，属于淡水生物细胞培养技术领域。它的步骤如下：配制细胞培养液；选取体重40-50克的螺在无菌水中饲养；对福寿螺进行表明消毒；解剖福寿螺；吸取福寿螺血液置于含有HBSS清洗液的细胞培养瓶，清洗血细胞；将清洗好的血细胞加入细胞培养液,将培养瓶置于5%的CO₂培养箱内,28℃恒温培养进行原代培养；过夜后，再加入细胞培养液，每隔5-7天吸出和换入等量的细胞培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶；本发明能在较短时间内快速、可重复地建立福寿螺血细胞的原代培养，所需要的细胞培养设备简单，可操作性强。本发明是对水生无脊椎动物细胞培养的重要补充，也为水生无脊椎动物的免疫机制研究提供基础资料。

主权项

一种福寿螺血细胞的原代培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）配制细胞培养液；（2）选取体重40‑50克的螺在无菌水中饲养12小时；（3）将螺表面的粘液用无菌棉签擦洗干净，将螺浸没在0.1%KMnO₄溶液中，进行表面消毒10‑20分钟；（4）用无菌蒸馏水清洗螺3‑5次；（5）用无菌滤纸吸干螺表面水分；（6）将螺置于用75%酒精消毒过的解剖盘中，解剖福寿螺；（7）用一次性无菌注射器从福寿螺心脏处抽取血液，放入含有1‑2mL HBSS清洗液的T‑25cm²细胞培养瓶，静置10‑15分钟，待血细胞贴壁后，吸除HBSS，加入新鲜的HBSS，重复3‑5次；（8）最后1次去除HBSS后，加入细胞培养液1‑1.5mL,将培养瓶置于5%的CO₂培养箱内,28℃恒温培养；（9）过夜后，再加入2‑1.5mL细胞培养液，每隔5‑7天吸出和换入60%‑‑70%量的细胞培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶；整个操作过程都是在无菌条件下进行的。