[发明专利]一种透射电镜检测古代丝织品的方法

摘要

本发明公开了一种透射电镜检测古代丝织品的方法，采用免疫技术的原理来检测古代丝织品。即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体浸渍于文物样的表面，洗涤干净后，形成抗原抗体复合物，然后将丝织品文物样切成很小的薄片，置于透射电镜下观察，可以根据样品表面有没有黑色的金纳米颗粒出现来定性分析。本发明的有益成果为：1本发明采用免疫技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白质的干扰，特异性强。2与现有技术相比，本发明成本低，操作简便，易于分析。

主权项

一种透射电镜检测古代丝织品的方法，其特征在于采用步骤如下：A)PBS7.4洗涤液配制：KCl 0.2g，KH₂PO₄ 0.27g，NaCl 8.0g，Na₂HPO₄ 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4；B)金纳米粒子的制备：采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25‑50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0‑1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/l的K₂CO₃溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20‑50μL；所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为1%‑10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000‑11000r/min下离心40‑60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris‑HCl溶液，所述Tris‑HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温‑20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为I、II，放置于打孔皿中；I设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80‑120μL的PBS溶液，II 组加入80‑120μL的由PH7.4的PBS溶液稀释10‑50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37℃下孵育1h；然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50‑70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。