[发明专利]一种体外重组的屏障缺陷表皮模型及构建方法

摘要

本发明涉及一种体外重组的屏障缺陷表皮模型及其构建方法,该缺陷模型在转染成功的表皮细胞中，兜甲蛋白基因水平的表达量为正常细胞的40％；用该细胞构建的模型，兜甲蛋白含量下降为正常模型的35％；该缺陷模型与正常模型相比，模型厚度为正常模型的60％；活细胞层数为3‑4层；模型活力测定OD值维持在0.8‑‑‑1.0。该屏障缺陷表皮模型的构建方法,包括兜甲蛋白基因缺陷表达的表皮细胞的制备、缺陷培养基的制备及屏障缺陷表皮模型的三维培养。本发明应用RNA干扰技术构建屏障缺陷的表皮替代模型，对于开发屏障修复性化妆品及化妆品功效性验证有重要意义。

主权项

一种体外重组的屏障缺陷表皮模型,其特征在于：使用兜甲蛋白基因的siRNA转染表皮细胞，在转染成功的表皮细胞中，兜甲蛋白基因水平的表达量为正常细胞的40％；用该细胞构建的模型，兜甲蛋白含量下降为正常模型的35％；该缺陷模型与正常模型相比，模型厚度为正常模型的60％；活细胞层数为3‑4层；模型活力测定OD值维持在0.8‑‑‑1.0，所述体外重组的屏障缺陷表皮模型的构建方法为：先将转染成功的表皮细胞进行液下培养，然后再进行气液面培养，模型总计培养周期为10d；所述siRNA的序列为GGCTCTCCTTCCTTCTCAGACAAGA；液下培养液的主要成分及含量为：基础培养液FAD 1L,氢化可的松 0.4‑0.6μg/mL，胰岛素 1‑1.5μg/mL，腺嘌呤 2.2‑2.4μg/mL，EGF 0.05‑0.15ng/mL；气液面培养液的主要成分及含量如下：基础液 FAD1L，氯化钙 0.47‑0.6mmol/L，氢化可的松 0.2‑0.4μg/mL，胰岛素 1‑1.5μg/mL，腺嘌呤 2.2‑2.4μg/mL，VC 20‑30ng/mL。