[发明专利]直接竞争TRFIA法检测喹乙醇的方法

摘要

本发明公开了一种直接竞争TRFIA法检测喹乙醇的方法，包括如下步骤：在抗原预包被条的每个微孔内分别加入喹乙醇标准液或是处理好的样品液以及铕标记单克隆抗体，混匀，37℃孵育1h，用洗涤液洗涤微孔3～5次；每个微孔加入200μL增强液，37℃避光振荡孵育10min；用时间分辨仪测定其荧光强度值cps；绘制标准曲线；根据每个样品的cpsx/cps0值从标准曲线上计算出对应的喹乙醇浓度，再乘以相应的稀释倍数，计算出样品中实际的喹乙醇浓度。本发明检测方法操作简单便捷，灵敏度高，稳定性好，其最低检测限可达0.83ng·mL‑1。

主权项

直接竞争TRFIA法检测喹乙醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：1).在抗原预包被条的每个微孔内分别加入50μL系列浓度的喹乙醇标准液或是处理好的样品液以及50μL铕标记的喹乙醇单克隆抗体Eu3+‑OLA‑mAb，混匀，37℃孵育1h，用洗涤液洗涤微孔3～5次；所述铕标记的喹乙醇单克隆抗体Eu3+‑OLA‑mAb的制备方法如下：(A)取0.5mL纯化好的喹乙醇单克隆抗体OLA‑mAb与0.5mL 0.01M pH为7.4的PBS溶液1:1混合，得A液；(B)准确称取3.0mg环化二乙烯三胺五醋酸酐，加入90μL DMSO溶解，得B液；(C)将90μL B液缓慢滴加到A液中，用0.125M NaOH调pH至9.0，室温避光放置2h；(D)将步骤(C)最终得到的反应液转移至透析袋中，0.01mol·L‑1pH7.4PBS透析过夜；(E)准确称取0.242g EuCl3·6H2O于20mL水中配成3.3×10‑2M EuCl3溶液；(F)取100μL步骤(E)所得溶液加入步骤(D)所得透析液中，室温避光反应3h后置于透析袋中透析24h～36h，分装保存于‑20℃，即得到铕标记的喹乙醇单克隆抗体Eu3+‑OLA‑mAb；2).每个微孔加入200μL增强液，37℃避光振荡孵育10min；3).用时间分辨仪测定其荧光强度值cps；4).以[1‑(cpsx/cps0)]*100％值为纵坐标，其中cpsx表示不同浓度喹乙醇标准液所对应的荧光值，cps0表示零标准浓度时所对应的荧光值；以喹乙醇浓度的对数值为横坐标绘制标准曲线；再根据每个样品的cps/cps0值从标准曲线上计算出对应的喹乙醇浓度，再乘以相应的稀释倍数，计算出样品中实际的喹乙醇浓度。