[发明专利]赤点石斑鱼成鱼染色体的制备方法

摘要

一种赤点石斑鱼成鱼染色体的制备方法，属于细胞生物学领域，它包括材料前期处理、制备肾细胞悬液、低渗处理、固定、滴片和染色；所述的材料前期处理为采用植物血细胞凝集素体内注射法，按15μg/g鱼体重的剂量，向实验鱼的胸鳍基部注射PHA，24h后按鱼体重2μg/g鱼体重的剂量注射秋水仙素溶液，在2.5‑3h后，取出头肾。本发明采用一次注射植物血细胞凝集素的地方法，同时增加注射浓度，在经过24h后就能获得良好的效果，节省了时间。本发明由于赤点石斑鱼的组织细胞特性，按现有技术进行低渗处理时很难得到完整的细胞，因此本发明创造性的改变现有技术，获得了清晰的染色体图片。

主权项

一种赤点石斑鱼成鱼染色体的制备方法，其特征在于它包括材料前期处理、制备肾细胞悬液、低渗处理、固定、滴片和染色，具体步骤如下：(1)材料前期处理所述的材料前期处理为采用植物血细胞凝集素体内注射法，按15μg/g鱼体重的剂量，向实验鱼的胸鳍基部注射PHA，24h后按2μg/g鱼体重的剂量注射秋水仙素溶液，在2.5－3h后，断尾失血20min，取出头肾；(2)制备肾细胞悬液将头肾组织于0.8％(重量百分比)的生理盐水中清洗，除去血块及其它组织，然后置于盛有0.8％(重量百分比)生理盐水的培养皿中，充分剪碎，再用四层医用纱布滤入离心管内，加入0.8％(重量百分比)生理盐水，用吸管吹打数分钟，静置片刻，制成细胞悬液；(3)低渗处理将细胞悬液用2200r/min的速度离心5min，弃上清，留底部0.8－1ml沉淀，加入7－8mL的0.75g/L的KCl低渗液，30℃下处理25min，低渗后用四层纱布重新过滤一遍；(4)固定低渗处理过滤后的滤液2200r/min离心5min，去上清，留底部0.8－1ml沉淀，加入7mL卡诺固定液，所述卡诺固定液的成分为甲醇和冰醋酸，甲醇和冰醋酸的体积比为3∶1，用吸管慢慢吹打沉淀至充分混匀，固定30min后2200r/min离心5min，弃上清，留底部0.8－1ml沉淀，加7mL固定液，固定，离心，再重复上述步骤两次；(5)滴片第3次固定后弃上清，加步骤(4)所述的卡诺固定液至1.8－2mL，轻轻弹打离心管底部，采用热滴片法进行滴片，所述的热滴片法：将清洁干净的玻片放在50℃的培养箱中预热30min以上，每次取出2张玻片进行滴片，于0.8－1m的高处滴到载玻片上，每片滴1－2滴，自然风干；(6)染色待玻片完全干燥后，用10％(体积比)的Giemsa染液染色30min后，用蒸馏水冲洗干净后晾干，显微镜下观察并拍照。