[发明专利]一种鱼类粘孢子虫的PCR快速检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种鱼类粘孢子虫PCR快速检测试剂盒及检测方法。本发明所述鱼类粘孢子虫的PCR快速检测试剂盒，包括：缓冲液；上、下游引物；聚合酶；阳性、阴性对照液；ddH₂O。本发明提供一种新型PCR快速检测试剂盒及检测方法，分别在PCR管中加入缓冲液，上、下游引物，聚合酶以及模板，混合均匀后，置于PCR扩增仪中，进行变性、退火、延伸共循环30次；反应结束后，取10μL产物在琼脂糖凝胶上，电泳，在紫外透射仪下观察PCR产物，与标准分子量相对照，阳性样品可出现580bp片段。本发明对鱼类粘孢子虫进行临床诊断切实可行，且具有快速、准确、特异的优点，满足临床诊断的要求，为检测鱼类粘孢子虫提供便利条件。

主权项

一种检测鱼类粘孢子虫的PCR快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括： (1)反应混合缓冲液，包含以下成分：KCl，MgCl₂，pH5.8的Tris‑HCl，dNTP； (2)检测引物的设计合成：根据GenBank中发布的粘孢子虫的基因序列，设计一对特异性检测引物，上游引物M‑F：5’‑ACCGTGGAAAATCTAGAGCTA‑3’，下游引物M‑R：5’‑GCTACTCTCTTGTCCAACTAC‑3’； (3)Taq酶； (4)灭菌的ddH₂O； (5)阳性对照液：粘孢子虫的基因组DNA； (6)阴性对照液：ddH₂O。