[发明专利]一种二化螟中肠干细胞的提取、分离及鉴定方法有效
| 申请号： | 201410602775.6 | 申请日： | 2014-11-02 |
| 公开（公告）号： | CN104328081A | 公开（公告）日： | 2015-02-04 |
| 发明（设计）人： | 韩兰芝;周艳聪;侯茂林;彭于发 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N5/07 | 分类号： | C12N5/07;G01N15/14 |
| 代理公司： | 北京兆君联合知识产权代理事务所(普通合伙) 11333 | 代理人： | 胡敬红 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种二化螟中肠干细胞的提取、分离及鉴定方法，采用胶原酶I酶解，使中肠细胞从中肠壁上脱落下来，然后采用密度梯度离心法或流式细胞仪将干细胞与成肠细胞分离，本发明高效的得到了高纯度的二化螟中肠干细胞，可用于后续的干细胞功能研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 二化螟 干细胞 提取 分离 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
二化螟幼虫中肠干细胞的提取、分离及鉴定方法，包括如下顺序步骤：(1)对二化螟幼虫外表进行消毒、解剖，取出中肠部分，(2)将中肠剪成小段，用含有1％双抗的浓度为0.1％胶原酶I的PBS溶液彻底消化后，加入培养基工作溶液依次用100目、200目细胞筛过滤，离心收集沉淀的细胞，用培养基工作溶液制成细胞悬浮液；所述彻底消化为在40℃水浴条件下，消化30‑40min；所述的培养基工作液是将昆虫细胞培养液和林格氏液以3:1的比例混合，并加入双抗和硫酸庆大霉素，且双抗和硫酸庆大霉素养在培养基工作液中的浓度均为1.0％；(3)将Ficoll‑Paque分离液加入离心管中，上层再加入细胞悬浮液，4℃和600g条件下，离心，最上层为干细胞；或者(3’)在细胞悬浮液中加入荧光染色剂，孵育，用过滤网将细胞悬浮液过滤到流式管中，然后用流式细胞仪分选并鉴定干细胞，采用单色荧光进行检测。
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