[发明专利]一种分离纯化百日咳毒素和丝状血凝素的方法在审
| 申请号： | 201410516960.3 | 申请日： | 2014-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN104311647A | 公开（公告）日： | 2015-01-28 |
| 发明（设计）人： | 陈道远;吴强;马礼耕;伍长华;李建霖 | 申请（专利权）人： | 成都欧林生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/235 | 分类号： | C07K14/235;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18 |
| 代理公司： | 成都金英专利代理事务所(普通合伙) 51218 | 代理人： | 袁英 |
| 地址： | 610000 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种分离纯化百日咳毒素和丝状血凝素的方法，它包括：S1.样品处理：百日咳杆菌培养结束后去除菌体、收集上清液，上清液用超滤膜包浓缩；S2.一次层析：包括洗脱杂蛋白、分离百日咳毒素和分离纯化丝状血凝素；S3.二次层析：将分离的百日咳毒素粗制品上样于CaptoMMC层析柱，缓冲液洗脱，收集OD280洗脱峰处的洗脱液，即为纯化的百日咳毒素。本发明采用CaptoSPImpRes层析柱、CaptoMMC层析柱对百日咳杆菌培养液的上清液进行分离纯化，可精确得到PT和FHA，质量可控，分离纯化百日咳抗原蛋白的纯度达95%以上，该方法具有操作简单、纯化速度快、成本低的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 分离 纯化 百日咳 毒素 丝状 血凝素 方法 | ||
【主权项】：
一种分离纯化百日咳毒素和丝状血凝素的方法，其特征在于，它包括以下步骤：S1. 样品处理：百日咳杆菌培养结束后将培养液立即降温至2～8℃，去除菌体、收集上清液，上清液用截留分子量为10KD的超滤膜包浓缩至原体积的1/12～1/8，调节浓缩液的pH至6.0；S2. 一次层析S21.洗脱杂蛋白：将上述浓缩液上样于平衡好的Capto SP ImpRes层析柱，用pH6.0、20mM PB、2M尿素、0.11M NaCl缓冲液洗脱杂蛋白；S22.分离百日咳毒素：再用pH6.0、20mM PB、2M尿素、0.17M NaCl的缓冲液进行洗脱，收集OD280洗脱峰处的洗脱液，即为百日咳毒素粗制品；S23：分离纯化丝状血凝素：然后用pH6.0、20mM PB、2M尿素、0.35M NaCl的缓冲液进行洗脱，收集OD280下洗脱峰处的洗脱液，即为纯化的丝状血凝素；S3. 二次层析：将步骤S22所得的百日咳毒素粗制品上样于平衡好的Capto MMC层析柱，用pH8.0、20mM PB、1M NaCl的缓冲液进行洗脱，收集OD280洗脱峰处的洗脱液，即为纯化的百日咳毒素。
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