[发明专利]一种基于恒温指数扩增反应与表面增强拉曼光谱检测的miRNA检测方法及其应用

摘要

本发明提供了一种基于恒温指数扩增与表面增强拉曼光谱检测的miRNA检测方法及其应用，本发明提供的miRNA检测方法结合恒温指数扩增反应(EXPAR)和表面增强拉曼光谱(SERS)技术，简单易行、检测特异性高、且能同时检测多个目标miRNA。该方法包括如下步骤：通过恒温指数扩增反应扩增待测miRNA；将扩增产物、捕获探针-金属纳米颗粒复合物、以及报告探针进行混合杂交，再将杂交产物转移到硅片上，进行SERS检测。

主权项

一种基于恒温指数扩增与表面增强拉曼光谱检测的miRNA检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1)提供或配置恒温指数扩增反应体系，扩增待测miRNA，通过恒温指数扩增反应扩增待测miRNA，得到扩增产物，其中，所述恒温指数扩增反应体系中包括待测样品和扩增模板；2)制备金属纳米颗粒，然后采用巯基修饰的捕获探针对所述金属纳米颗粒进行标记，得到捕获探针‑金属纳米颗粒复合物；3)提供报告分子修饰的报告探针；4)将步骤(1)所得的扩增产物、步骤(2)所得的捕获探针‑金属纳米颗粒复合物、以及步骤(3)所述的报告探针进行混合，得到反应液，所述反应液在55～95℃下孵育2～10分钟后，自然冷却到室温，离心、洗涤、去上清，再将沉淀转移到硅片上，自然晾干后进行SERS检测；其中，步骤(1)所述的扩增模板、步骤(2)所述的捕获探针、步骤(3)所述的报告探针均为单链脱氧核糖核苷酸，所述捕获探针和报告探针互不相同，且不互补；所述步骤(1)中，所述扩增模板包括X序列和T序列，所述X序列和T序列之间具有切刻内切酶的识别序列；所述X序列与待测miRNA互补，所述T序列包括C序列和R序列，所述C序列为捕获探针的核苷酸序列，所述R序列为报告探针的序列。