[发明专利]一种抗肝纤维化药物高通量筛选细胞模型的构建及应用

摘要

本发明基于Ⅰ型胶原α1在肝纤维化过程中高表达的特征，建立了以Ⅰ型胶原α1基因COL1A1启动子活性为靶点的高通量筛选系统，通过Ⅰ型胶原α1基因COL1A1启动子片段与pGL4.17表达载体重组质粒的构建、转染人肝星状细胞系(LX2)、以载体pGL4.17荧光素酶表达强度检测COL1A1启动子活性为指标，经筛选获得了稳定的单克隆细胞株LX2-COL，应用该细胞株对化合物S1-S7进行筛选，获得了对COL1A1启动子活性有明显抑制作用的化合物S7；mRNA实时RT-PCR及Western blotting分析均表明化合物S7能在转录及蛋白水平明显降低Ⅰ型胶原α1的表达，有望成为抗肝纤维化的候选药物。同时，表明所建立的系统可以在抗肝纤维化药物高通量筛选中得到应用。

主权项

一种抗肝纤维化药物高通量细胞筛选模型，其特征是，所述模型由Ⅰ型胶原α1基因启动子序列COL1A1P、携带荧光素酶报告基因pGL4.17载体构建的重组质粒pGL4.17‑COL1A1P、稳定表达COL1A1启动子的单克隆细胞株LX2‑COL、抗性筛选试剂G418、作为LX2活化诱导剂的致肝纤维化细胞因子TGF‑β1以及荧光素酶报告基因检测系统构成。