[发明专利]利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法

摘要

本发明涉及利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法，属于生物发酵检测技术领域。本发明利用紫外分光光度计作为检测工具构建鸟苷紫外指纹图谱，从而构建紫外指纹图谱与鸟苷生成量关系的数学模型，通过模型实现鸟苷产量的在线检测，其具体步骤分为模型建立、模型验证和模型应用。本发明为鸟苷产量测定提供一套高效、准确、快速的新方法，该方法操作简单、快速，将有力的推动鸟苷发酵检测技术的创新。

主权项

利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法，其特征在于，利用紫外分光光度计作为检测工具构建鸟苷紫外指纹图谱，从而构建紫外指纹图谱与鸟苷生成量关系的数学模型，通过模型实现鸟苷产量的在线检测，具体操作包括下列步骤：步骤(1)，模型建立：A、鸟苷发酵：1)菌种活化取平板上的单菌落划线接种于活化斜面，36‑38℃恒温静置培养12‑14h；2)种子培养接两环生长良好的活化斜面菌种放入装有种子培养基的摇瓶中，纱布封口，置于往复式摇床上，36‑37℃振荡培养12‑18h，得到种子液；3)鸟苷发酵将上述种子液以10％的接种量接入装有发酵培养基的三角瓶中，置于往复式摇床上，36‑37℃，培养72h，获得发酵液；B、取步骤(1)经过充分混匀的发酵液，用蒸馏水稀释500倍，得到待测发酵液样品；设置紫外分光光度计采集条件为：对待测发酵液样品进行紫外光谱扫描，其波长扫描范围为210‑300nm，采样间隔1nm，光谱带宽0.1nm，扫描速度为1nm/s，其参比为蒸馏水，测定在250nm，260nm，280nm，290nm处的吸光度；C、纸层析法测定鸟苷产量：将发酵液沸水浴4‑6min，离心取上层清液，上清液点样，纸层析测定；D、根据测得的鸟苷产量与紫外吸光度，得到鸟苷产量与紫外吸光度A250、A260、A280和A290之间的函数关系为：c＝15.7653*A250‑26.5632*A260+59.2183*A280‑55.0967*A290其中，c为鸟苷产量，A250、A260、A280、A290分别为此时发酵液在250nm，260nm，280nm，290nm处的吸光度；步骤(2)，模型验证：按步骤(1)的A步骤分别进行2‑5次发酵，取其不同时间段的发酵液用蒸馏水稀释500倍后按步骤(1)的B步骤设置紫外光谱采集条件，分别测定相应波长吸光度，根据所建模型预测鸟苷产量，并与实际产量进行比较分析；预测值与实际值相对误差的绝对值平均小于5％；其中，实际产量采用步骤(1)的C步骤进行测定；步骤(3)模型应用：按步骤(1)建立的模型，取待测发酵液用蒸馏水稀释500倍，得到待测发酵液样品，备用；按步骤(1)的B步骤设置紫外光谱采集条件，以蒸馏水为参比，依次扫描待测发酵液样品的紫外光谱，并测定相应波长的吸光度，利用建立模型预测鸟苷产量，获得该发酵液中的鸟苷产量。