[发明专利]利用DNA吸附柱快速提取植物DNA的试剂盒及方法

摘要

本发明涉及一种利用DNA吸附柱快速提取植物DNA的试剂盒及方法，属于生物技术领域。所述试剂盒的组成包括裂解液、抽提液、沉淀剂、去蛋白液、漂洗液、洗脱液和DNA吸附柱。方法包括植物组织样品的前处理、DNA的游离与杂蛋白的抽除、DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除、DNA洗脱。利用该试剂盒能够快速提取植物基因组DNA，所得到的基因组DNA具有较高的纯度。

主权项

一种利用DNA吸附柱快速提取植物 DNA的试剂盒快速提取植物 DNA 的方法，其特征在于，依次包括以下步骤 ：（1）植物组织样品的前处理：称取0.5g 植物组织样品，用液氮研磨成粉末；（2）DNA的游离与杂蛋白的抽除：将样品粉末装入2ml 的离心管中，加入800μl 裂解液，振荡器震荡30秒后，在 65℃ 水浴锅中温育30分钟，每5分钟震荡一次，温育结束后加入800μl 抽提液，震荡30秒后，12000rpm 离心10 分钟，将上清移至新的离心管中；（3）DNA 吸附柱吸附DNA以及杂质的去除：在含有上清的离心管中加入等体积的沉淀剂，混匀后加入到DNA吸附柱中，12000rpm 离心1 分钟，弃废液，加入500μl 去蛋白液，12000rpm 离心1分钟，弃废液，加入500μl漂洗液去其他杂质，12000rpm 离心1分钟，弃废液，再次加入500μl漂洗液，12000rpm 离心1分钟，弃废液，然后12000rpm 离心2分钟，静置吹干；（4）DNA 洗脱：往 DNA 吸附柱中加入30μl 洗脱液，12000rpm 离心 2 分钟，收集液体；所述试剂盒的组成包括：（1）裂解液：0.1M Tris‑HCl pH 8.0，0.025M EDTA pH 8.0，8‑9% 重量比 NaCl，3% 重量比CTAB，2% 重量比巯基乙醇 ；（2）抽提液：氯仿；（3）沉淀剂：70% 重量比乙醇 ；（4）去蛋白液：5M 盐酸胍，20 mM Tris‑HCl pH6.6，使用前加入乙醇，使乙醇浓度为38％；（5）漂洗液：20mM NaCl，2mM Tris‑HCl pH7.5 ；（6）洗脱液：10mM Tris‑HCl pH 8.5 ；（7）DNA 吸附柱。