[发明专利]一种黄葛愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法

摘要

本发明研究了一种黄葛愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞培养等步骤。本发明方法利用细胞悬浮培养方法可以快速获得遗传性状稳定的黄葛细胞，繁殖率高，在短期内提供大量的制药原料，并能有效降低生产成本。

主权项

 一种黄葛愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞培养等，主要步骤如下：（1）取黄葛幼嫩叶片，按照常规的消毒方法对其进行消毒处理；（2）将步骤（1）消毒处理过的黄葛叶片接入培养基MS+IAA0.2mg/L+2ip1mg/l+15mg/L广大霉素诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，暗期16h，光期8h；（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织放入培养基MS+2，4‑D 0.2mg/L+TDZ0.1mg/L+柠檬酸100mg/L进行愈伤组织增殖培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照3000lx；（4）取步骤（3）增殖后的愈伤组织放入液体培养基MS+NAA 0.05‑0.1mg/L+ZT0.2‑0.4 mg/L +ABA1‑3mg/L+硝酸镧1‑3 mg/L进行悬浮细胞培养，附加蔗糖30g/L， PH5.8，光照4000lx；按照权利要求1所述的一种黄葛愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1）中所述黄葛无菌叶片的获得为，取黄葛的叶片，先在漂白粉中浸泡3min，流水冲洗为25min，超净工作台上次氯酸钠处理10min，无菌水冲洗5‑7遍。