[发明专利]蜂王浆中三种脂肪酸含量的检测方法及应用

摘要

本发明提供一种蜂王浆中三种脂肪酸含量的检测方法，所述三种脂肪酸分别为3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸，通过气相色谱方法测定蜂王浆中3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸的含量。本发明提供的色谱条件可以使色谱峰得到较好的分离，操作简便，准确快捷，灵敏性高，重现性好。并且通过这些有效成分的含量了解蜂王浆的质量品质，为蜂王浆质量标准提供了新的指标。

主权项

一种蜂王浆中三种脂肪酸含量的检测方法，所述脂肪酸为3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）以对羟基苯甲酸甲酯、3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸为对照品，制成一定含量的对羟基苯甲酸甲酯、3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸的溶液，甲硅烷化衍生，通过气相色谱测定其图谱，以对羟基苯甲酸甲酯为内标物，由对羟基苯甲酸甲酯与3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸的特征吸收峰面积的比值和对照品的进样量的比值绘制标准曲线；（2）将待测蜂王浆加溶剂超声处理，过滤得滤液，甲硅烷化衍生，制得供试品；（3）在与步骤（1）相同的色谱条件下测定步骤（2）制得的供试品的气相色谱图谱，并分别计算对羟基苯甲酸甲酯、3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸的特征吸收峰峰面积，根据步骤（1）绘制的标准曲线、添加内标质量和称取蜂王浆的质量得到待测蜂王浆中3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸的含量；其中步骤（1）用80%~100%乙醇溶解对羟基苯甲酸甲酯、3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸对照品，制成对羟基苯甲酸甲酯浓度为0.1 mg/ml~0.15 mg/ml、3‑羟基癸酸浓度为0.004 mg/ml~0.05 mg/ml、10‑羟基癸酸浓度为0.013 mg/ml~ 0.14 mg/ml和癸二酸浓度为0.0015 mg/ml~0.025 mg/ml的对照品溶液，吸取对照品溶液，使用滤膜过滤，挥干溶剂，再用纯乙醚溶解，吸取乙醚溶液，使用滤膜过滤，之后挥干溶剂，加入300 μl~500 μl纯吡啶和BSTFA+TMS的混合溶液，所述混合溶液的体积为80 μl~120 μl ，50°C~70°C水浴30分钟~60分钟，然后使用气相色谱检测；步骤（2）使用80%~100%乙醇制成对羟基苯甲酸甲酯浓度为0.5 mg/ml~0.75 mg/ml的内标溶液，称取0.5 g蜂王浆，置于容量瓶中，加入100 μl~1000 μl 0.01mol/l~0.03 mol/l盐酸，振荡溶解蜂王浆，吸取3ml~7ml的内标溶液加入容量瓶，用80%~100%乙醇稀释至刻度，超声15分钟~30分钟，制成待测溶液，吸取待测溶液，使用滤膜过滤，挥干溶剂，再用纯乙醚溶解，吸取乙醚溶液，使用滤膜过滤，之后挥干溶剂，加入300 μl~ 500 μl纯吡啶和BSTFA+TMS的混合溶液，所述混合溶液的体积为80 μl~120 μl ，50°C~70°C水浴30分钟~60分钟，然后使用气相色谱检测；步骤（1）和步骤（3）中采用气相色谱法的是毛细管柱气相色谱法；气相色谱的色谱条件是：使用分流进样；采用 (5%‑苯基)‑甲基聚硅氧烷为涂层的毛细管色谱柱，载气为氮气；检测器为FID检测器；气相色谱的进样口温度为250°C，分流比为1：10～1：30，进样量1 μl；柱箱程序升温起始温度50°C，保持5分钟，然后以5°C/分钟速度上升至300°C；检测器温度为330°C；所采用 (5%‑苯基)‑甲基聚硅氧烷为涂层的毛细管色谱柱为Rtx‑5柱，柱长30 m，内径0.25 mm，涂层厚0.25 μm。