[发明专利]一种阳离子化丝素蛋白及其制备方法

摘要

本发明公开了一种阳离子化丝素蛋白及其制备方法，属于生物医用高分子材料技术领域。阳离子化丝素蛋白由水溶性2‑亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐介导鱼精蛋白硫酸盐偶联经硫代琥珀酰亚氨基‑4‑[N‑马来酰亚胺甲基]‑环己烷‑1‑羧酸酯活化的丝素蛋白反应得到，它具有良好的生物相容性和降解性、可控的表面电荷密度、有效压缩并保护DNA的能力、较高的转染效率、独特的细胞靶向及细胞核定位功能。本发明提供的阳离子化丝素蛋白可通过静电作用与基因物质形成阳离子化丝素/基因复合物，是一种具有细胞靶向性及细胞核定位功能的可生物降解的新型阳离子化丝素基因传递载体。

主权项

一种阳离子化丝素蛋白的制备方法，将蚕丝脱胶后得到的丝素溶解，经透析、过滤得到丝素蛋白溶液，其特征在于再用鱼精蛋白对丝素蛋白进行阳离子化改性，包括如下步骤：(1) 将硫代琥珀酰亚氨基‑4‑[N‑马来酰亚胺甲基]‑环己烷‑1‑羧酸酯溶解于PBS缓冲溶液中，将得到的溶液滴加到浓度为1～20 mg/ml的丝素蛋白溶液中，按质量百分比，硫代琥珀酰亚氨基‑4‑[N‑马来酰亚胺甲基]‑环己烷‑1‑羧酸酯为丝素蛋白的0.25～5 %；在温度为0～4 ℃、搅拌条件下反应后，再经超滤离心处理后，得到截留分子量为9～12 kDa的活化丝素蛋白溶液；(2) 将硫酸鱼精蛋白溶解于含5 mM EDTA的PBS缓冲溶液中，再加入水溶性2‑亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐，硫酸鱼精蛋白的浓度为1～20 mg/ml，鱼精蛋白与2‑亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐按质量比为1:(1～20)；在温度为0～4 ℃、搅拌条件下反应后，得到巯基化鱼精蛋白溶液；(3)将步骤 (2) 得到的巯基化鱼精蛋白溶液与步骤 (1) 得到的活化丝素蛋白溶液混合，巯基化鱼精蛋白与活化丝素蛋白的质量比为（0.025～0.1）：1；在温度为0～4 ℃的条件下反应，将得到的反应液在去离子水中透析,截留分子量为9～12 kDa，再经超滤离心处理，得到经鱼精蛋白改性的阳离子化丝素蛋白溶液。